整合素β1介导膀胱癌丝裂霉素C化疗抵抗中的作用研究

摘要

背景与目的:
　　膀胱癌细胞粘附于细胞外基质纤维连接蛋白(FN),对丝裂霉素C(MMC)的化疗呈现抵抗性。本研究通过体外细胞实验鉴定整合素β1在介导膀胱癌细胞与FN粘附中的作用,探讨整合素β1在细胞粘附介导的MMC抵抗中发挥的作用。本研究还通过建立整合素β1表达下调的膀胱癌细胞和裸鼠膀胱癌皮下移植瘤模型,在动物体内研究下调整合素β1的表达对MMC治疗膀胱癌疗效的影响。
　　材料和方法:
　　1、功能阻断性抗体封闭膀胱癌细胞表面的整合素β1分子,细胞粘附实验观察细胞在FN上的粘附,流式细胞学方法检测MMC诱导膀胱癌凋亡的变化。
　　2、设计、合成siRNA(small interfering RNA),干扰膀胱癌细胞整合素β1的表达,western实验检测siRNA下调整合素β1蛋白的效率。MMC处理细胞,流式细胞学方法检测生长在FN上的膀胱癌细胞的凋亡变化,并采用western试验检测细胞内凋亡信号通路分子PI3-K(Phosphatidylmositol3-kinases)、AKT、p-AKT的表达改变。
　　3、构建靶向整合素β1的逆转录病毒MDH1-PGK-GFP2.0-integrinpl-shRNA(short hairpin RNA)表达载体,基因转染技术将其转入包装细胞293T。包装产生的病毒感染膀胱癌细胞,流式细胞仪筛选病毒阳性感染的细胞。
　　4、病毒感染的膀胱癌细胞接种于裸鼠皮下,形成成瘤后给予裸鼠MMC治疗,观察肿瘤的变化。
　　结果:
　　1、抗体封闭膀胱癌细胞表面的整合素β1分子,显著降低细胞对FN的粘附,逆转生长在FN上的膀胱癌细胞对MMC的化疗抵抗。
　　2、设计的siRNA有效地下调膀胱癌细胞整合素β1蛋白的表达。下调整合素β1的表达显著增强细胞在FN上对MMC的敏感性,抑制细胞内抗凋亡信号通路分子PI3-K、p-AKT/AKT的活化。
　　3、成功构建靶向整合素β1的MDH1-PGK-GFP2.0-integrinβ1-shRNA表达载体。293T细胞包装产生的病毒成功感染膀胱癌细胞,流式细胞仪筛选得到病毒阳性转染的细胞。
　　4、膀胱癌细胞接种于裸鼠皮下,成功建立膀胱癌动物模型。定期给予MMC腹腔内注射,转染整合素β1-shRNA的肿瘤显著小于对照组。
　　结论:
　　1、整合素β1介导膀胱癌细胞与细胞外基质FN的粘附。
　　2、整合素β1介导细胞和FN的粘附可诱导膀胱癌细胞对MMC的化疗抵抗。
　　3、下调膀胱癌整合素β1的表达,可以在体内外提高MMC治疗膀胱癌的效果。