Ca(OH)2和Hoshino’s制剂对猪牙乳头细胞增殖和成骨分化的影响

摘要

目的：探讨氢氧化钙制剂（Ca(OH)2制剂）和三联抗生素制剂（Hoshino’s制剂）对体外培养的猪牙乳头细胞（pDPCs)增殖和成骨分化的影响，以期为临床使用牙髓血管再生治疗时根管消毒药物的选择提供一定的理论依据。
　　材料和方法：本实验将第4代pDPCs细胞分别接种于含15％胎牛血清（FBS）的DMEM培养液(标准培养液)、含有10%、1%、0.1% Ca(OH)2制剂浓度的DMEM培养液以及含有0.5%、0.1%、0.05%Hoshino’s制剂浓度的DMEM培养液中，分别记为空白对照组（A组）、10%Ca(OH)2组（B1组）、1%Ca(OH)2组（B2组）、0.1%Ca(OH)2组（B3组）和0.5%Hoshino’s组（C1组）、0.1%Hoshino’s组（C2组）、0.05%Hoshino’s组（C3组）。①将各组培养液刺激下的第4代pDPCs细胞分别在培养的第1、3、5、7、9d时，用CCK-8比色法检测各组OD值，比较各组细胞的增殖情况。②应用BCIP/NBT碱性磷酸酶显色试剂盒，定性检测各组pDPCs细胞2周时碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP)的表达情况。③通过p–硝基苯磷（p-NPP）ALP试剂盒，定量检测各组pDPCs细胞两周时ALP活性。④利用ANOVA（P=0.05）来判断Ca(OH)2和Hoshino’s制剂对pDPCs细胞的增殖与成骨分化是否有影响。
　　结果：①CCK-8结果显示，体外培养第7d时，各组细胞的生长达到最高峰；第7d时，空白对照组细胞的增殖速度显著高于Ca(OH)2组细胞，提示 Ca(OH)2制剂抑制了pDPCs细胞的增殖（P<0.05）；体外培养第3d开始，空白对照组细胞的增殖速度显著高于Hoshino’s组细胞，提示 Hoshino’s制剂可抑制 pDPCs细胞的增殖，第7d时0.5%浓度的Hoshino’s组细胞甚至完全死亡。②BCIP/NBT碱性磷酸酶显色实验显示，空白对照组、Ca(OH)2组和Hoshino’s组pDPCs细胞ALP染色反应均为阳性，细胞被染成蓝紫色，各组pDPCs细胞内均有ALP表达。③p-NPP定量检测ALP结果显示，与空白对照组相比较，Ca(OH)2和Hoshino’s组pDPCs细胞的ALP活性明显上调，成骨分化能力显著提高。并且随着Hoshino’s制剂浓度的增加，pDPCs细胞单位ALP的表达有增加的趋势.
　　结论：①Ca(OH)2制剂和Hoshino’s制剂均可抑制pDPCs细胞的增殖；②Ca(OH)2制剂和Hoshino’s制剂均可促进pDPCs细胞ALP的表达，有利于 DPCs细胞的成骨分化；③在进一步的实验，希望通过建立有效的根管内药物缓释的模型，排除两种药物干扰细胞增殖的因素后，直接比较两者对DPCs细胞表达ALP的影响，从而寻求更有利于DPCs细胞成骨分化的药物。

目录

封面

声明

中文摘要

英文摘要

缩略词表

目录

前言

1 实验材料和仪器

1.1 主要材料

1.2 主要仪器

2 实验方法

2.1 pDPCs的传代纯化

2.2 Ca(OH)2及Hoshino’s浸提液的制备

2.3 实验分组

2.4 CCK-8检测pDPCs细胞的增殖能力

2.5 ALP定性染色实验

2.6 细胞内ALP定量测定

2.7 统计学分析

3 结果

3.1 pDPCs细胞形态观察

3.2 pDPCs增殖能力比较

3.3 ALP定性染色

3.4 细胞内ALP定量检测结果

4 讨论

4.1 pDPCs细胞的传代纯化

4.2 pDPCs的增殖能力比较

4.3 细胞内ALP的检测

全文总结

参考文献

附录 综述:年轻恒牙牙髓血管再生治疗

致谢

攻读硕士期间发表的学术论文目录

七年制学位论文要求