可降解镁锌合金与肝外胆管上皮细胞生物相容性及其在胆总管中降解行为的研究

摘要

研究目的：
　　目前临床上对可降解胆道支架有迫切需求。本课题旨在研究可降解镁锌合金材料与肝外胆管上皮细胞（MEBDECs）的生物相容性及其在胆总管中的降解行为。
　　材料和方法：
　　本课题包括体内外的动物实验、细胞实验和降解实验。具体如下：镁锌合金支架植入家兔胆总管后，检测术前和术后重要血生化指标的变化；胆总管、肝、肾组织切片作HE染色和免疫组化检测；支架植入胆总管后作CT扫描检查；胆总管中取出的支架作失重和扫描电镜检查；在体外实验中，原代的肝外胆管上皮细胞与不同浓度的镁锌合金浸提液培养，作MTT评估其毒性、流式细胞仪检测细胞周期和凋亡；电化学试验、浸泡、析氢试验等方法用来评估镁锌合金在胆汁中的降解速率；样本表面作扫描电镜和元素图谱分析。
　　研究结果：
　　生物相容性：
　　1.体内实验：支架植入家兔胆总管后，其术前术后的重要血生化指标水平无明显变化。胆总管等组织没有明显的坏死和炎症改变。镁锌合金支架植入后会引起胆总管组织中caspase3基因表达降低。
　　2.体外细胞学实验：MTT检测表明：20％-40%浓度的镁锌合金浸提液对MEBECs的生长无明显影响。流式细胞仪检查发现:140%浓度的浸提液会引起细胞凋亡，100%浓度的浸提液会导致MEBECs细胞周期S期阻滞和导致细胞坏死。RT-PCR结果表明，40%浓度的浸提液会引起Bax、Bax/Bcl-2、NF-κ B、caspase-3表达增高。
　　降解行为：
　　1.体外实验。镁锌合金圆片在胆汁中浸泡1、4、7和10天后,其重量分别减少了2.5、14.1、15.4和14.2 mg。相比于在Hanks液中，在胆汁中浸泡10天后的样本表面有更多的降解产物。镁锌合金在胆汁中的降解速率快于其在Hanks液中、其在胆汁中的交流阻抗比在Hanks液中低。
　　2.体内实验。镁锌合金支架植入后一周几乎无明显降解，三周后胆总管中仅剩有9%的支架。镁锌合金在胆总管中的降解率约为0.107 mm2year-1。CT和扫描电镜也证明了上述结果。
　　结论：
　　镁锌合金植入家兔胆总管后对肝脏、肾脏、胰腺的结构和功能无明显影响。低浓度的镁锌合金浸提液会引起MEBECs凋亡，高浓度的浸提液会导致细胞坏死。20%-40%浓度的浸提液对MEBECs是安全的。镁锌合金在胆总管中能逐渐降解，其降解行为符合临床上对胆道支架支撑时间的要求。

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符号和单位说明

前言

一、胆道外科支架现状

二、胆道支架在内镜下胰胆管造影术中的应用现状

三、可降解胆道支架的研究现状

四、镁锌合金支架的优点和缺点

五、镁锌合金的分子生物学研究

六、总结

第一部分 镁锌合金与肝外胆管上皮细胞生物相容性

材料与方法

1实验材料、试剂和主要仪器

2实验方法

结果

1 体内实验结果

2 体外实验结果

讨论

第二部分 镁锌合金在胆总管中的降解行为

材料与方法

1实验材料、试剂和主要仪器

2 实验方法

结果

1 体外降解实验

2 体内降解实验

讨论

全 文 小 结

参考文献

致谢

攻读学位期间发表的论文