神经激肽A对大鼠深Ⅱ度烧伤创面愈合的影响及其机制探讨

摘要

背景：
　　皮肤组织作为人身体上的最大的器官，其对于神经具有非常高的敏感性，皮肤组织的许多的生理功能如皮肤创面修复，身体体温调节，免疫功能以及代谢功能，都和神经支配有着很密切的关系。皮肤组织中的神经作为人机体周围神经系统的一部分，其来源于背根神经节中的神经元。皮肤组织中包括了表皮，真皮，皮肤附属结构，血管，神经系统以及皮下脂肪层，它们都和神经支配有着很密切的关系。皮肤组织可以表达分泌多种类型的神经肽，它们既可以有来自其它皮肤细胞例如血管内皮细胞，成纤维细胞以及角质形成细胞，也可以来自于感觉神经元，其中，感觉神经元是其最主要的分泌表达方式。通常所说，表皮内的神经包含了神经激肽A，P物质以及CGRP，而真皮内的神经则包含了神经激肽A，P物质，CGRP以及VIP。随着对皮肤免疫相关疾病的研究，人们发现神经和神经肽也都参与了炎症反应—神经源性炎症反应（inflammation-cutaneous neurogenic inflammation）。
　　当皮肤组织损伤时，如果失去神经支配，皮肤组织创面愈合将会出现明显的延迟，表明周围神经释放的感觉神经肽与创面愈合有着密切的关系。皮肤组织创面中的神经肽可以促进细胞组织释放多种类型的细胞因子，从而引起神经生长因子的分泌，从而可以促进创面皮肤神经纤维的生长。皮肤创面修复愈合时，支配受损伤组织的周围神经可以通过分泌释放包括神经肽在内的多种介质参与创面愈合的调控过程，而神经肽在神经系统和受损伤组织间起着非常重要的信号介导作用。
　　神经激肽A（Neurokinin A，NKA），又名为K物质（Substance K）或者神经介质L（Neuromedin L），作为一种神经速激肽，其广泛分布于机体的中枢神经系统和周围神经系统中，在创面修复愈合的过程中发挥着非常重要的作用。神经激肽 A和神经肽 P物质（SP）有着共同的前体——前速激肽原（pre-protachykinin，PPT），其由来自编码P物质的共同的TAC1基因编码生成。相点羟脯氨酸含量均较B组明显增加。
　　神经激肽A和P物质在机体中枢神经系统中的分布区域内高度重合，而在外周神经系统中，两者主要分布在对辣椒素比较敏感的感觉神经内。神经激肽A不仅可以参与对创面外周神经的修复，而且还对创面修复愈合中的多种炎性细胞（中性粒细胞，巨噬细胞以及淋巴细胞等）和多种细胞因子（IL-6，IL-1，TNF-α，TGF-α等）的调控产生作用，同时还对成纤维细胞，血管内皮细胞的迁移，分化，增殖产生影响，从而对创面修复愈合产生作用。本研究将对神经激肽 A对创面愈合的影响进行初步探讨。
　　方法：
　　建立大鼠深Ⅱ度烧伤创面模型。随机分为A，B两组，每组36只。A组大鼠创面局部注射神经激肽A，B组大鼠创面局部用注射等量磷酸盐缓冲液（PBS）作为对照，于伤后即刻和伤后1，3，7，10，14天不同时相点，测量并计算大鼠的创面愈合率，并作统计学分析；取不同时相点的创面组织切片作免疫荧光细胞化学染色和免疫酶细胞化学染色，结合计算机图像分析，比较创面新生血管数，巨噬细胞数，中性粒细胞数，并作统计学分析；测定创面皮肤组织羟脯氨酸（HYP）含量，并作统计学分析；对不同时相点的创面组织，作转化生长因子-α（TGF-α），IL-1，IL-6和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）浓度测定，并作统计学分析。
　　结果：
　　1.从伤后7d起，A组各时相点创面愈合率都要明显高于B组。在伤后14d，A组创面已经基本全部再上皮化，而B组大鼠创面的愈合率只达到85.12±3.14％。
　　2.从伤后7d起，A组创面新生血管化程度与B组相比，均有明显增加。
　　3.从伤后1d起，A组与B组大鼠的羟脯氨酸含量均有所下降，而随着大鼠创面的逐渐修复愈合，创面的羟脯氨酸含量持续上升。A组在伤后7d起各时相点羟脯氨酸含量均较B组明显增加。
　　4.从伤后3d起，A组和B组大鼠创面内中性粒细胞含量均达到峰值，A组创面早期炎症细胞（中性粒细胞）浸润量较B组相比，有明显增加。在创面愈合后期，B组创面内中性粒细胞持续存在。
　　5.从伤后7d起，A组和B组创面内巨噬细胞含量均达到峰值，A组创面早期炎症细胞（巨噬细胞）浸润量较B组相比，有明显增加。在创面愈合后期，B组创面内巨噬细胞持续存在。
　　6. A组创面TGF-α，IL-1，IL-6和TNF-α浓度在一开始就比B组浓度高，在第3天时达到高峰，随后下降，而B组创面相关因子浓度在第7天达到高峰，随后下降。
　　结论：
　　1.应用外源性神经激肽A可促进加快大鼠创面新生血管的再生；增加大鼠创面胶原蛋白的含量，可以促进大鼠深Ⅱ度烧伤创面的愈合。
　　2.外源性神经激肽A促进大鼠深Ⅱ度烧伤创面愈合的机理可能是：趋化创面中性粒细胞和巨噬细胞的早期浸润；趋化创面细胞因子的早期浸润。

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前言

材料与方法

1 实验动物

2主要仪器设备

3大鼠深Ⅱ度烧伤创面模型制作

4动物分组与设计

5实验方法

6实验室检测指标

7 统计学处理

实验结果

1.大鼠深II度烧伤模型的建立

2 两组大鼠创面愈合率比较

3. 两组创面新生血管比较

4 两组创面巨噬细胞（MΦ）比较

5 两组创面中性粒细胞（PMN）比较

4. 两组大鼠创面组织中羟脯氨酸（HYP）含量的变化

5两组大鼠深Ⅱ度烧伤创面组织中相关细胞因子的比较

小结

讨论

一．创伤定义及创面愈合的过程

二．神经因素与神经肽对创面愈合的影响

三 神经激肽A对大鼠深Ⅱ度烧伤创面愈合的影响

参考文献

致谢

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