Gata6在胰岛素瘤中的作用及机制研究

摘要

目的：
　　胰岛素瘤是一类低增殖率肿瘤，发病比较罕见，对其发病机制了解甚少。近来研究发现 Gata6在调控胰岛细胞的分化的过程中发挥重要作用，亦参与体内一些肿瘤的形成。目前关于Gata6在胰岛素瘤中表达及作用未见报道，本实验拟探讨Gata6在胰岛素瘤中的表达及作用机制。
　　方法：
　　通过RT-PCR及Western-blot技术检测Gata6在胰岛素瘤组织瘤体及瘤旁的表达差异；利用免疫荧光技术检测 Gata6在胰岛素瘤及正常胰腺切片中的表达及定位。转染SiRNA干扰Min6细胞Gata6表达后流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期变化，同时利用荧光探针 DCFH-DA检测细胞内ROS变化。Gata6质粒过表达后流式细胞仪检测细胞周期变化及BrdU免疫组化观察Min6细胞的增殖。棕榈酸对待Min6细胞，观察细胞活力变化、细胞凋亡、ROS变化以及Gata6表达变化，过表达Gata6后棕榈酸对待，观察ROS、Bcl-2及Bax变化。
　　结果：
　　1) Gata6在小鼠胰岛素瘤细胞系Min6细胞、大鼠胰岛素瘤细胞系INS-1细胞以及人胰岛素瘤中均存在表达，Gata6在胰岛素瘤瘤体组织表达较瘤旁组织表达显著增高，具有统计学差异（p<0.05）。
　　2) Gata6免疫荧光显示，胰岛素瘤瘤体正常胰岛结构丧失，Gata6主要在定位于细胞核中，在胰岛素瘤中大量表达。
　　3) siRNA干扰Gata6表达后，细胞凋亡较对照组显著增加，具有统计学差异（p<0.01）；细胞周期分析显示处在S期细胞比例减少（p<0.01），提示沉默 Gata6表达后对细胞的增殖起一定的抑制的作用。
　　4)过表达Gata6对Min6细胞的细胞周期及增殖无明显的影响。
　　5)500uM棕榈酸对待Min6细胞24h导致Gata6表达较对照组显著下降（P<0.01），可引起细胞内ROS产生增加（p<0.05）。
　　6) siRNA干扰Gata6表达导致细胞ROS产生增加（p<0.01），过表达Gata6可减少PA诱导的ROS的产生（p<0.05）。
　　7)棕榈酸对待Min6细胞导致Bcl-2表达减少，Bax表达增加，且Bcl-2/Bax比值减少，差异具有统计学意义（P<0.05）；过表达Gata6后使PA诱导的Bax减少（p<0.05），Bcl-2/Bax比值增加，且差异具有统计学意义（p<0.05），提示过表达Gata6后可
　　一定程度改善PA导致的细胞凋亡。
　　结论：
　　Gata6在胰岛素瘤中高表达，通过减少 ROS的产生及胰岛素瘤细胞的凋亡，可能在胰岛素瘤发病机制中发挥重要的作用。

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缩略词

引言

实验材料与方法

1 实验材料和主要仪器

1.1 实验细胞系

1.2 siRNA

1.3 主要试剂主要试剂

1.4实验耗材与仪器

2. 实验方法

2.1胰岛素瘤组织标本实验

2.2 细胞实验

3 统计学处理

结果

第一部分 Gata6在胰岛素瘤体的表达及对瘤细胞的凋亡及增殖的影响

1 胰岛素瘤瘤体及瘤旁组织Gata6的表达

2 胰岛素瘤及正常胰腺组织的Gata6免疫荧光

3 Gata6在小鼠胰岛素瘤细胞系 Min6细胞及大鼠胰岛素瘤细胞系 INS-1细胞中的表达

4 Min6细胞Gata6免疫荧光

5 SiRNA 干扰Gata6表达的验证

6 SiRNA干扰Gata6表达后对Min6细胞凋亡的影响

7 SiRNA干扰Gata6表达对Min6细胞周期的影响

8 Gata6质粒过表达效果验证

9 质粒过表达Gata6对Min6细胞周期的影响

10 BrdU免疫组化观察Gata6质粒过表达对增殖的影响

第二部分 过表达Gata对PA诱导ROS产生及凋亡的影响

1 棕榈酸对Min6的细胞活力影响

2 棕榈酸对Min6细胞凋亡的影响

3 棕榈酸对待Min6细胞对Gata6表达的影响

4 干扰Gata6可导致ROS异常增加且过表达Gata6可减少PA诱导ROS的产生

5 过表达Gata6对PA诱导细胞凋亡的影响

讨论

结论

参考文献

致谢

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