异菝葜皂苷元抗氧化应激损伤的神经细胞保护作用及机制研究

摘要

氧化应激与包括神经退行性疾病（neurodegenerative diseases，NDD）在内的众多人类疾病的发生发展密切相关。异菝葜皂苷元（smilagenin,SMI）是来源于知母的脂溶性小分子甾体皂苷元。前期研究证明其为治疗NDD的潜在有效药物，但关于SMI是否具有针对氧化应激损伤的神经保护潜能还未可知。本文建立氧化应激损伤细胞模型，对SMI抗氧化应激能力进行检测，并初步探讨SMI抗过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)氧化损伤可能涉及的分子作用机制。
　　首先我们以SH-SY5Y及 PC12细胞为研究对象，研究SMI对H2O2或氯化钴（cobalt chloride，CoCl2）损伤细胞的神经保护作用。MTT结果显示,SMI预处理浓度依赖的提高了H2O2损伤SH-SY5Y及PC12细胞存活率，但对于CoCl2损伤的细胞则无明显影响。形态学观察发现SMI预处理显著的改善H2O2损伤SH-SY5Y细胞的形态。接着我们对SMI抗H2O2氧化损伤SH-SY5Y细胞的分子作用机制展开研究。ROS检测结果表明，SMI显著抑制H2O2导致的细胞内ROS水平异常升高；Western Blot结果显示，H2O2处理诱导细胞内p-Akt/Akt和HSP70表达，但SMI预孵育进一步提高了p-Akt/Akt和HSP70的表达水平，使用PI3K抑制剂阻断Akt磷酸化后，HSP70的诱导表达几乎被完全阻断，但本实验条件下HSP90的表达并不被影响。
　　综上所述，我们的研究首次表明SMI具有抗H2O2诱导的氧化应激损伤神经保护潜能，但不能阻止CoCl2对SH-SY5Y及PC12细胞造成的损伤，且其抗H2O2氧化损伤神经细胞的作用机制可能与降低胞内ROS水平，高度激活PI3K/Akt/HSP70信号通路有关。

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前言

第一章 异菝葜皂苷元抗氧化应激诱导细胞损伤的神经保护作用

1.1 引言

1.2 材料

1.2.1 细胞、药品和试剂

1.2.2 仪器

1.2.3 溶液配置

1.3 方法

1.3.1 实验设计

1.3.2 SH-SY5Y及PC12细胞的培养1) 细胞复苏

1.3.3 分组与处理

1.3.4 细胞存活率的测定

1.3.5 细胞形态观察

1.3.6 统计学分析

1.4 结果

1.4.1 SMI预孵育对H2O2损伤SH-SY5Y细胞存活率的影响

1.4.2 SMI预孵育对H2O2损伤PC12细胞存活率的影响

1.4.3 SMI预孵育对CoCl2损伤SH-SY5Y细胞存活率的影响

1.4.4 SMI预孵育对CoCl2损伤PC12细胞存活率的影响

1.4.5 SMI预保护H2O2损伤SH-SY5Y细胞的形态学观察

1.5 小结

第二章 异菝葜皂苷元保护SH-SY5Y细胞对抗H2O2氧化损伤的分子机制研究

2.1 引言

2.2 材料

2.2.1 细胞、药品和试剂

2.2.2 仪器

2.2.3 溶液配置

2.3 方法

2.3.1 实验设计

2.3.2 细胞培养与处理

2.3.3 细胞内ROS水平检测

2.3.4 Western blotting

2.3.5 统计学分析

2.4 结果

2.4.1 SMI抑制H2O2诱导的SH-SY5Y细胞内ROS蓄积

2.4.2 SMI对H2O2损伤SH-SY5Y细胞内Akt磷酸化的影响

2.4.3 SMI对H2O2损伤SH-SY5Y细胞内HSP70及HSP90表达的影响

2.4.4 LY294002对SMI预处理H2O2损伤SH-SY5Y细胞中HSP70表达的影响

2.5 小结

讨论

全文总结

参考文献

缩写词表

致谢

攻读硕士学位期间主要研究成果