粪便microRNAs检测在胰腺导管腺癌早期诊断中的应用

摘要

【目的】本文通过检测胰腺导管腺癌患者癌组织、配对癌旁组织、胰液及粪便microRNAs，评价粪便microRNAs筛查诊断PDAC的价值。
　　【方法】本研究收集上海交通大学附属仁济医院胆胰外科2012年1月到2013年12月间30例PDAC患者癌组织及配对的癌旁正常胰腺组织，其中20例患者的胰液及10例慢性胰腺炎患者胰液，30例PDAC患者粪便标本，10例慢性胰腺炎（CP）患者及15例健康志愿者粪便标本。建立基于qRT-PCR检测PDAC组织、胰液及粪便miRNAs的方法，应用该法检测各组样本miR-21、miR-155、miR-196a、miR-216及 miR-217的表达量。应用受试者工作曲线(Receiver Operating Characteristic Curve，ROC）及其曲线下面积(AUC）评估粪便microRNAs对PDAC的诊断价值。
　　【结果】 MiR-21、miR-155、miR-196a、miR-216及 miR-217在癌组织、癌旁组织、胰液及粪便标本中均可被检测。五个目的miRNAs在癌组织及配对正常胰腺组织中表达量相对较高，平均CT值在13.11-25.53之间。目的miRNAs在胰液及粪便中的表达水平相似，相对较低，平均CT值在30.99-35.45之间。本研究中RNU6B在所有样本中均可被检测到且表达水平较高，所以我们选择其作为内参。本研究中我们所建立的提取及检测胰液(R2=0.9609，P<0.0001及R2=0.9357，P<0.0001）和粪便（R2=0.9882，P<0.0001及 R2=0.9068，P<0.0001) miRNAs方法具有很高的可重复性。MiR-21，miR-155，miR-196a在PDAC组织中表达水平显著高于癌旁组织，而miR-216，miR-217在PDAC组织中表达水平显著低于癌旁组织（P<0.05）。与慢性胰腺炎患者胰液相比，在PDAC患者胰液中miR-21和miR-155的相对表达水平显著增加而miR-196a和miR-216的相对表达水平显著降低（P<0.05）。与慢性胰腺炎及健康对照组相比，PDAC患者粪便中miR-21及miR-155的相对表达水平都显著增加，miR-216的相对表达水平显著降低（P<0.05）。因此我们选取在组织、胰液和粪便中表达变化一致的三个miRNAs（miR-21、miR-155和miR-216）进行下一步的诊断分析。PDAC组与对照组相比，miR-21、miR-155及miR-216两两组合后的AUC均比单个miRNA的AUC高，而三者联合后的AUC在所有组合中最高达到0.8667（95％CI0.7722~0.9612），诊断胰腺癌的敏感性和特异性分别为83.33％和83.33％。两组比较差异有统计学意义（P<0．0001）。
　　【结论】（1）胰液和粪便中miRNAs的抽提和检测具有很高的可重复性。（2） miR-21、miR-155和miR-216在PDAC患者组织、胰液及粪便中的表达趋势一致。（3）粪便中miR-21、miR-155和miR-216联合对PDAC具有较高的诊断敏感性和特异性，有可能成为PDAC诊断的潜在分子标志物。

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绪论

参考文献

第一部分 胰腺导管腺癌组织及胰液中miRNAs表达检测

前言

材料和方法

结果

讨论

小结

参考文献

第二部分 粪便miRNAs表达检测及对胰腺导管腺癌诊断价值分析

前言

材料和方法

结果

讨论

小结

参考文献

攻读硕士学位期间参与的其他工作： 胰腺导管腺癌中LKB1的表达与临床病理指标及预后关系的研究

摘要

前言

材料和方法

结果

讨论

参考文献

致谢

攻读硕士学位期间的成果