PD-1参与调节系统性红斑狼疮中B细胞功能的研究

摘要

系统性红斑狼疮（Systemic Lupus Erythematosus，SLE）是一种累及多系统多器官的自身免疫性疾病。SLE患者中T淋巴细胞和B淋巴细胞异常活化造成机体免疫功能亢进，导致其外周存在高滴度的抗核抗体，形成抗原抗体复合物沉积，从而造成多器官和组织的损伤。SLE作为一种典型的自身免疫性疾病，对其发病机制的探究是寻找有效的免疫干预手段的重要前提。
　　由于T细胞和B细胞的异常活化在SLE的发生发展中起着关键的作用，T-B细胞相互作用的分子机制的研究对于阐明 SLE的发病机制具有重要的意义。本研究首先采用流式细胞术方法检测了系统性红斑狼疮患者外周CD4+T和B细胞表面活化分子和协同刺激分子的表达，结果显示SLE患者B细胞表面活化分子CD69的表达显著高于正常人，并与抗dsDNA滴度呈正相关；同时患者CD4+T细胞表面活化分子CD69和HLA-DR的表达也均显著高于正常人，并与抗dsDNA抗体水平呈正相关。表明SLE患者外周T细胞和B细胞均发生异常活化；我们进一步分别检测SLE患者外周血CD4+T细胞和B细胞表面协同刺激分子对的表达，包括PD-1/PD-L1，ICOS/ICOSL,OX40/OX40L及CD40/CD40L的表达，结果显示SLE患者CD4+T细胞表面PD-1的表达显著高于正常人，并与抗核抗体、抗dsDNA抗体滴度呈现正相关； SLE患者B细胞表面PD-L1的表达显著高于正常人，与抗dsDNA抗体呈现正相关；SLE患者B细胞表面ICOSL的表达显著高于正常人，与抗dsDNA抗体呈现正相关；SLE患者CD4+T细胞表面ICOS的表达显著高于正常人，并与血清IgG水平正相关；SLE患者B细胞表面OX40L的表达显著高于正常人，并与血清抗核抗体水平正相关；SLE患者CD4+T细胞表面OX40与CD40L及B细胞表面CD40的表达均显著高于正常人，但与疾病严重程度（SLEDAI）无明显相关性。
　　SLE患者T细胞表面PD-1和B细胞表面PD-L1的表达增高，并与患者外周血抗dsDNA抗体水平正相关，提示PD-1/PD-L1可能参与B细胞的分化和功能调节。为此，本研究体外采用纯化的PD-1蛋白刺激正常人 B细胞，研究 PD-1/PD-L1信号通路对B细胞功能的影响，结果显示PD-1分子直接作用于B细胞后，B细胞表面IgG和PD-L1的表达水平显著高于对照组；B细胞刺激上清中分泌的IgG抗体水平显著高于未刺激对照组，但是 B细胞表面 CD38和CD138表达水平未有改变；同时刺激组B细胞内Erk磷酸化水平显著高于对照组，其他信号通路分子如Pyk2、NF-?B磷酸化水平与对照组无明显差异。
　　综上所述，我们的研究结果表明： SLE患者的CD4+T细胞和B细胞处于相对活化的状态；同时CD4+T细胞和B细胞表面的协同刺激分子对PD-1/PD-L1、ICOS/ICOSL、OX40/ OX40L及CD40/CD40L等的表达都有增高，提示T/B细胞通过这些分子对的相互作用而在疾病的发生和发展中发挥重要的作用；其中PD-1可以直接诱导B细胞表达PD-L1，并活化B细胞和促使B细胞分泌抗体功能增强，但不能诱导B细胞向浆细胞分化，对B细胞粘附和迁移能力也无明显影响。上述结果表明异常表达增高的PD-1/PD-L1可能参与系统性红斑狼疮B细胞的异常活化和抗体产生，为PD-1/PD-L1作为新的疾病治疗靶点提供了理论依据。

目录

封面

声明

中文摘要

英文摘要

目录

绪论

第一章 系统性红斑狼疮中CD4+T和B细胞共刺激分子对表达及意义

1.1材料

1.1.1检测对象

1.1.2主要试剂

1.1.3主要仪器

1.2方法和步骤

1.2.1 CD4+T和B细胞表面活化分子检测

1.2.2 CD4+T和B细胞表面协同刺激分子检测

1.2.3 收集临床资料

1.2.4统计学分析方法

1.3 结果

1.3.1 SLE 患者、正常人外周血CD4+T细胞、B细胞表面活化分子检测

1.3.2 SLE 患者、正常人外周血CD4+T细胞和B细胞表面协同刺激分子检测

1.4 讨论

第二章 PD-1／PD-1参与调节B细胞功能的研究

2.1材料

2.1.1检测对象

2.1.2主要试剂

2.1.3主要仪器

2.2方法和步骤

2.2.1外周血单个核细胞（PBMCs）的分离

2.2.2 PD-1蛋白体外刺激B细胞

2.2.3 流式检测刺激后B细胞表面分子及核内分子磷酸化

2.2.4 刺激后B细胞上清IgG和IgM水平的检测

2.2.5 统计学分析方法

2.3 结果

2.3.1 PD-1刺激 B细胞表面分子表达水平检测

2.3.2 PD-1刺激后B细胞核内磷酸化水平检测

2.3.3 PD-1刺激B细胞后培养上清液中IgG、IgM水平检测

2.4 讨论

全文结论

参考文献

致谢

攻读硕士研究生学位期间发表学术论文目录