在弥漫大B细胞淋巴瘤中冬凌草甲素通过ROS介导DNA损伤及JNK通路活化从而诱导凋亡

摘要

目的：
　　该研究主要探讨了提取于冬凌草中的二萜类化合物冬凌草甲素在弥漫大B细胞淋巴瘤体内及体外的细胞毒性作用以及其诱导细胞凋亡效应的机制研究。
　　实验方法：
　　采用CCK-8的方法得出不同浓度冬凌草甲素处理各DLBCL细胞株48小时的生长抑制程度；用瑞氏吉姆萨染色观察药物处理后细胞形态的变化；用流式AnnexinV/PI双染色检测细胞凋亡情况；应用蛋白免疫印迹方法检测内源性凋亡相关蛋白以及MAPK通路相关蛋白的变化水平；用流式细胞术检测用药前后胞内ROS水平及γH2AX的变化；使用小鼠模型验证冬凌草甲素在DLBCL的体内效应。
　　结果：
　　冬凌草甲素处理弥漫大B细胞淋巴瘤细胞株后能够通过ROS介导DNA损伤反应及JNK通路活化，从而诱导内源性凋亡。ROS清除剂NAC能够抑制冬凌草甲素所诱导的凋亡，减少磷酸化组蛋白H2AX及磷酸化JNK的表达。人弥漫大B细胞淋巴瘤细胞株裸鼠异种移植模型及用药处理实验证明了冬凌草甲素能够在体内显著抑制肿瘤的生长，而未显示明显毒性。
　　结论：
　　冬凌草甲素通过诱导细胞凋亡从而显著抑制弥漫大B细胞淋巴瘤的生长，其诱导凋亡的主要机制是通过ROS介导的DNA损伤反应及JNK通路的活化。

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全文缩略语中英文对照

1.1引言

1.1.1 DLBCL分型、致病机制及治疗

1.1.2冬凌草甲素

1.1.3 细胞凋亡相关介绍

1.1.4 活性氧分子

1.2材料和方法

1.2.1试剂与仪器

1.2.2 细胞培养，冻存及复苏

1.2.3细胞生长抑制实验（CCK-8法）

1.2.4 细胞形态学观察

1.2.5 免疫印迹分析

1.2.6 流式检测细胞凋亡

1.2.7ROS检测

1.2.8流式检测γH2AX

1.2.9 DLBCL小鼠模型

1.2.10 组织病理切片及HE染色

1.2.11 TUNEL分析

1.2.12统计分析

1.3结果

1.3.1冬凌草甲素抑制DLBCL细胞株的增殖

1.3.2 冬凌草甲素诱导DLBCL细胞株发生凋亡

1.3.3 冬凌草甲素通过活化JNK通路诱导凋亡

1.3.4在DLBCL细胞株中冬凌草甲素导致DNA损伤应答

1.3.5 冬凌草甲素引发ROS产生，后者介导DLBCL细胞凋亡

1.3.6在小鼠模型中冬凌草甲素抑制DLBCL的生长

1.4讨论

1.5展望

1.6结论

参考文献

附录

致谢