OX40-OX40L共刺激通路介导嗜碱性粒细胞始动过敏性气道炎症的研究

摘要

背景:
　　支气管哮喘是以Th2免疫应答为主的慢性过敏性气道炎症。近年研究发现嗜碱性粒细胞在不同疾病模型中能够诱发Th2免疫应答，但其具体机制目前尚不清楚。OX40-OX40L共刺激通路在Th细胞分化及哮喘中均发挥重要作用。
　　目的:
　　通过体内外研究阐释并明确嗜碱性粒细胞始动过敏性气道炎症的作用，在此基础上进一步探讨嗜碱性粒细胞启动Th2免疫反应诱发过敏性气道炎症的信号分子机制。
　　方法:
　　1.利用OVA免疫小鼠建立哮喘气道炎症模型，观察在哮喘炎症早期小鼠纵隔淋巴结(Mediastinal lymph nodes，MLN)中嗜碱性粒细胞、树突状细胞(Dendritic cells，DCs)和Th2细胞的时间变化曲线和嗜碱性粒细胞表面分子表达的变化。
　　2.建立IL-3诱导小鼠骨髓细胞定向分化为嗜碱性粒细胞的体外培养体系;流式细胞仪分选嗜碱性粒细胞并鉴定。在此基础上观察髓源性嗜碱性粒细胞(Bonemarrow-derived basophils，BM-Bas) OX40和OX40L表达特点。
　　3.建立体外嗜碱性粒细胞诱导Th2细胞分化体系，在此基础上采用OX40L封闭性抗体（抗小鼠CD252抗体）或者OX40-/-小鼠na(i)ve T细胞，观察在OX40-OX40L共刺激通路阻断条件下对嗜碱性粒细胞诱导Th2细胞分化的影响。
　　4.利用OVA致敏、激发C57BL/6小鼠构建哮喘模型，在此基础上在致敏阶段尾静脉注射OX40L阻断性抗体（抗小鼠CD252抗体），观察气道病理组织学改变、血清OVA特异性IgE（Ovalbumin-special immunoglobulin E，OVA-sIgE）、支气管肺泡灌洗液(Bronchial alveolar lavage fluid, BALF)中嗜酸性粒细胞数量和BALF中Th2型细胞因子IL-4、IL-5和IL-13的变化。
　　5.建立体外过继性回输MLN嗜碱性粒细胞诱发小鼠哮喘模型，观察阻断OX40-OX40L共刺激通路后受体小鼠MLN Th2细胞比例变化及气道病理组织学、血清OVA-sIgE、BALF中嗜酸性粒细胞数量和Th2型细胞因子IL-4、IL-5和IL-13的变化。
　　结果:
　　1.在哮喘炎症早期，MLN中嗜碱性粒细胞数目显著增加，而DCs无明显变化，并且嗜碱性粒细胞数达到峰值时间早于Th2细胞。同时嗜碱性粒细胞表面OX40L信号分子变化最为显著。
　　2.体外IL-3诱导BM-Bas并受DNP-OVA和抗DNP-IgE复合物刺激后诱导性表达OX40L。
　　3.体外阻断OX40-OX40L共刺激通路减少嗜碱性粒细胞诱导Th2细胞分化比例。
　　4.致敏阶段抗小鼠CD252抗体阻断OX40-OX40L共刺激通路降低哮喘小鼠血清OVA-sIgE、减少BALF中嗜酸性粒细胞数量、降低BALF中IL-4、IL5和IL-13水平，减轻肺组织过敏性气道炎症。
　　5.体外过继性回输MLN嗜碱性粒细胞启动Th2免疫应答诱发小鼠哮喘炎症，而OX40-/-受体小鼠和回输OX40L处理的嗜碱性粒细胞的WT C57BL/6受体小鼠MLN中Th2细胞比例降低，肺部过敏性气道炎症减轻。
　　结论:
　　1.嗜碱性粒细胞早期参与始动过敏性气道炎症。
　　2.嗜碱性粒细胞在体内外诱导性表达OX40L。
　　3.OX40-OX40L共刺激通路介导嗜碱性粒细胞诱导Th2细胞分化。
　　4.在OVA诱导的过敏性气道炎症中，OX40-OX40L共刺激通路介导嗜碱性粒细胞诱发Th2免疫应答，导致过敏性气道炎症。

目录

声明

摘要

绪论

第一部分 嗜碱性粒细胞参与早期过敏性气道炎症

引言

1 实验材料

2 实验方法

3 数据统计及分析

实验结果

1 嗜碱性粒细胞参与早期过敏性气道炎症

2 在OVA免疫小鼠的MLN中嗜碱性粒细胞高表达OX40L

讨论

1 嗜碱性粒细胞在早期过敏性气道炎症中的作用

2 OVA免疫小鼠MLN嗜碱性粒细胞高表达OX40L

第二部分 髓源性嗜碱性粒细胞表达OX40L并诱导Th2细胞分化

引言

材料与方法

1 实验材料

2 实验方法

3 数据统计及分析

实验结果

1 分选高纯度、高活力的BM-Bas

2 BM-Bas诱导性表达OX40L

3 OX40-/-小鼠基因型鉴定

4 OX40L介导嗜碱性粒细胞诱导Th2细胞分化

讨论

1 分选高纯度髓源性嗜碱性粒细胞

2 髓源性嗜碱性粒细胞诱导性表达OX40L

3 嗜碱性粒细胞在体外诱发na?ve T细胞向Th2细胞分化

4 OX40L介导嗜碱性粒细胞诱发Th2细胞分化

第三部分 OX40-OX40L共刺激通路介导嗜碱性粒细胞始动Th2免疫反应诱发过敏性气道炎症

引言

材料与方法

1 实验材料

2 实验方法

3 数据统计及分析

实验结果

1 OX40-OX40L共刺激通路参与早期过敏性气道炎症

2 在体外过继性回输嗜碱性粒细胞诱发的过敏性气道炎症小鼠中，阻断OX40-OX40L共刺激通路可调抑嗜碱性粒细胞诱导Th2免疫反应

3 在体外过继性回输嗜碱性粒细胞诱发的过敏性气道炎症小鼠中，阻断OX40-OX40L共刺激通路可调抑嗜碱性粒细胞介导的过敏性气道炎症

讨论

1 OVA诱发的过敏性气道炎症致敏阶段阻断OX40-OX40L共刺激通路减轻气道炎症

2 过继性回输嗜碱性粒细胞启动Th2免疫应答，诱发过敏性气道炎症

结论

参考文献

致谢

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