SIRT2调控NF-κB去乙酰化修饰在创伤性脑损伤中的作用和机制研究

摘要

研究背景：Sirtuin2(SIRT2)是NAD+依赖的去乙酰化酶Sirtuin家族中的一员。近年来的研究证实SIRT2抑制可以有效治疗神经退行性疾病。但是，目前为止，SIRT2在创伤性脑损伤（TBI）中的作用和机制仍未见报道。我们利用控制性皮层撞击损伤（CCI）和细胞牵张损伤模型研究 SIRT2抑制及基因敲除（KO）在TBI中的作用。
　　研究方法：C57Bl/6雄性小鼠随机分组后接受CCI或假手术。SIRT2特异性抑制剂AK-7在损伤前30min经腹腔注射给药。在TBI后1天和3天，利用磁共振成像及称量法计算脑水肿体积和脑组织含水量。检测损伤侧脑组织中Evans Blue渗出量和紧密连接蛋白表达改变来评估血脑屏障（BBB）的完整性。免疫荧光和流式细胞仪标记计数TBI后激活的小胶质细胞；定量PCR和酶联免疫（ELISA）检测炎症因子水平；Western blot检测NF-κB乙酰化和核转移水平，核蛋白电泳迁移实验验证乙酰化 NF-κB与 DNA结合特性。Garcia神经评分和疲劳转棒实验评价小鼠TBI后神经功能。为验证SIRT2抑制在TBI中的作用，体内和体外水平观察SIRT2 KO在TBI后神经细胞损伤和神经功能上的改变。
　　研究结果：CCI造成明显的脑水肿和脑组织水含量增加。SIRT2抑制剂AK-7处理在TBI后1天和3天显著增加脑水肿体积和脑组织水含量，同时加重3天和7天时神经功能障碍。SIRT2抑制后BBB的破坏和基质金属蛋白酶9（MMP-9）表达及活性增加。AK-7增加体内和体外水平TBI导致的小胶质细胞激活。炎症因子PCR和ELISA结果也提示SIRT2抑制增加了TBI后促炎症因子表达。分子机制方面，SIRT2抑制增加了NF-κB p65乙酰化和核转移水平，使其与启动子序列DNA结合能力得到加强而提高转录活性，从而上调p65靶基因包括水通道蛋白4（AQP-4），MMP-9和炎症因子的表达。SIRT2基因敲除增加了细胞牵张损伤导致的神经细胞乳酸脱氢酶（LDH）释放，和CCI损伤周围区神经细胞凋亡，并加重TBI后神经功能障碍。
　　总结：SIRT2抑制通过增加NF-κB p65乙酰化水平和活性加重TBI；SIRT2 KO使神经元对损伤更加敏感，加重 TBI后神经功能障碍。我们的结果为 SIRT2的抗炎症作用增加了证据，也初步证实了SIRT2的神经保护作用。

目录

中英文缩写一览表

绪论

1. 蛋白质翻译后修饰

2. 蛋白质乙酰化修饰

材料和方法

1实验材料

2实验方法

第一章SIRT2在创伤性脑损伤后表达变化

1 研究背景

2 研究结果

3讨论与小结

第二章SIRT2抑制加重TBI后脑水肿和神经功能障碍

1 研究背景

2 研究结果

3讨论与小结

第三章 SIRT2抑制加重TBI后血脑屏障破坏

1研究背景

2研究结果

3讨论与小结

第四章 SIRT2抑制在TBI后炎症反应中的作用和机制

1.研究背景

2研究结果

3讨论与小结

第五章 SIRT2基因敲除加重TBI后神经损伤和神经功能障碍

1研究背景

2研究结果

3.讨论与小结

全文总结

主要结果

主要结论

参考文献

致谢

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