维生素 K2预防激素型股骨头坏死的实验研究

摘要

目的：体外观察激素及激素联合应用维生素 K2对骨髓间充质干细胞、成骨细胞及血管内皮细胞生物学的影响，体内观察维生素 K2对大鼠激素型股骨头坏死模型的预防作用.
　　方法：第一部分：提取SD大鼠BMSC，分别用5*10-5M MP及MP联合梯度浓度的VK2（10-7M-10-5M）进行干预，检测BMSC增值能力，细胞活性及成骨诱导3周后成骨相关蛋白Runx2、ALP、OCN的表达水平及BMSC矿化水平。第二部分：MC3T3-E1细胞分别用10-5M DEX及 DEX联合梯度浓度的VK2（10-7M-10-5M）进行干预，检测 MC3T3-E1的增值能力，细胞凋亡，及成骨相关蛋白 Runx2、ALP、OCN的表达及矿化能力。第三部分： EAhy926、MG63分别用10-5M DEX、10-6M VK2及DEX联合10-6M VK2进行干预，检测EAhy926的增值能力，细胞凋亡，体外成管，迁移能力及EAhy926、MG63成管相关蛋白的表达水平。第四部分：甲强龙注射建立SD大鼠激素型股骨头坏死模型，预防性应用VK2干预，检测各组血清OCN分泌水平、股骨头坏死发生率、股骨头标本Runx2、OCN蛋白表达水平及股骨头血运情况，评价VK2对激素型股骨头坏死的预防作用。第五部分：梯度浓度VK2(10-7M-10-5M)干预hBMSC，检测成骨诱导1周后miR-133a及成骨相关蛋白表达水平；建立miR-133a过表达hBMSC细胞株，成骨诱导条件下梯度浓度VK2干预，检测miR-133a及成骨蛋白表达。
　　结果：第一部分：MP明显抑制了BMSC的增值能力，细胞活性及成骨相关蛋白的表达，而VK2促进了激素干预的BMSC的细胞增值，增强了其活性，同时促进了激素干预的BMSC成骨分化能力。第二部分：DEX明显抑制了MC3T3-E1细胞增值，促进细胞凋亡并抑制了MC3T3-E1的成骨分化，而联合应用VK2促进了MC3T3-E1细胞增值及成骨分化能力，抑制了细胞凋亡。第三部分：DEX、VK2对EAhy926细胞增值无明显影响，DEX抑制了EAhy926细胞的成管及EAhy926、MG63成管相关蛋白的表达，VK2促进了DEX干预的EAhy926细胞的成管及EAhy926、MG63成管相关蛋白的表达。第四部分：VK2提高了激素干预大鼠血清羧化和非羧化 OCN水平，促进了OCN的羧化，降低了激素干预大鼠股骨头坏死的发生率，同时提高股骨头骨小梁结构及相关蛋白的表达，保护股骨头血供。第五部分：miR-133a过表达明显抑制了 hBMSC成骨相关蛋白的表达，而VK2同时降低了hBMSC及过表达miR-133a hBMSC中 miR-133a表达水平，并促进了hBMSC的成骨分化。
　　结论：VK2能够保护骨髓间充质干细胞、成骨细胞及血管内皮细胞等免受激素的损害，促进成骨及成血管，预防大鼠激素型股骨头坏死的发生，且 VK2对BMSC成骨分化的作用可能是通过抑制miR-133a的表达实现的。

目录

缩略词表

第一章 绪论

第二章 维生素K2对激素处理的骨髓间充质干细胞的影响

2.1前言

2.2 材料和方法

2.3结果

2.4 讨论

2.5 小结

第三章 维生素K2 对激素干预的成骨细胞MC3T3-E1的影响

3.1 前言

3.2 材料和方法

3.3 结果

3.4 讨论

3.5 小结

第四章 维生素K2对激素干预的血管内皮细胞的影响

4.1 前言

4.2 材料和方法

4.3 结果

4.4 讨论

4.5 小结

第五章 维生素K2对大鼠激素型股骨头坏死的预防性研究

5.1 前言

5.2 材料和方法

5.3 结果

5.4 讨论

5.5 小结

第六章 microRNA-133a在VK2成骨调节中的作用

6.1 前沿

6.2 材料和方法

6.3 结果

6.4 讨论

6.5 小结

第七章 结论

参考文献

致谢

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