FEV调控胚胎造血并指示出生前起源的白血病

摘要

了解肿瘤的起源对研究肿瘤的病因学和治疗学有很重要指导作用。研究表明多数儿童恶性肿瘤在胚胎时期发生，然而临床上缺乏有效的诊断方法辨别肿瘤的出生前起源和出生后起源。本论文研究了胚胎造血与儿童白血病的关系，提出转录因子FEV的表达可以作为出生前起源的白血病的标志。
　　我们研究发现FEV的表达具有高度的保守性，其表达仅限于胚胎造血细胞，且功能实验证明FEV调控胚胎造血干细胞的自我更新能力。有趣的是，FEV在婴儿白血病细胞和成人白血病细胞中的表达差异与其在出生前后的造血细胞中的表达差异非常相似，绝大多数婴儿白血病细胞表达 FEV，但在几乎所有的成人白血病细胞中检测不到FEV的表达。由于婴儿白血病起源于胚胎时期，我们推测FEV的表达可能作为出生前起源的白血病的指示。进一步研究发现多数儿童急性淋巴系白血病和急性髓细胞白血病细胞表达FEV，异种移植实验证明缺失FEV的白血病干细胞的白血病重建能力显著下降。总之，我们发现FEV在胚胎造血细胞中表达，是胚胎造血干细胞自我更新的重要调控因子；发现FEV在出生前起源的白血病细胞表达，对白血病干细胞的疾病重建能力发挥重要作用，可以作为白血病干细胞新的特异性的靶点。

目录

全文主要缩略语中英文对照表

1 绪论

1.1 HSCs自我更新能力的调控

1.2不同发育阶段HSCs的特性及功能调控

1.3白血病的起源研究

1.4 FEV的研究进展

1.5科学问题及研究内容

2 材料与方法

2.1实验材料

2.2小鼠胎肝和骨髓造血细胞的获取

2.3人的胎肝、脐带血和骨髓单个核细胞的分离

2.4病人标本

2.5小鼠HSPCs的富集

2.6人CD34+HSPCs的富集

2.7流式分选脐带血HSPCs

2.8流式分选LSCs

2.9转染目的基因的GFP+细胞的分选

2.10 细胞培养

2.11 细胞总RNA的抽提

2.12 cDNA的制备

2.13 RT-PCR

2.14 基因组PCR

2.15 qRT-PCR

2.16 慢病毒包装及滴度测定

2.17 慢病毒病毒感染造血细胞

2.18 逆转录病毒的包装

2.19 逆转录病毒感染HSPCs

2.20 CFC及重铺板实验

2.21 LTC-IC实验

2.22 HSCs和LSCs的异种移植

2.23 HSCs的造血重建检测

2.24 二次移植

2.25 MLL-AF9白血病模型

2.26 MLL-AF9 AML的免疫表型检测

2.27 HE染色

2.28 免疫蛋白印记

2.29 细胞周期检测

2.30 细胞凋亡检测

2.31 数据统计分析

3 结果

3.1 FEV仅在胚胎造血细胞中表达

3.2 FEV调控HSCs自我更新能力

3.3 FEV的表达可能是胚胎起源白血病的标志物

3.4 出生后起源的白血病模型细胞中FEV保持沉默

3.5 FEV是LSCs疾病重建必需的

4 结论与讨论

4.1 结论

4.2 讨论

参考文献

致谢

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