抗人TNF-α单抗Z12识别的抗原表位研究及其人源化改造

摘要

该论文的创新点在于建立一种以计算机模拟结果为理论依据从而指导实验设计和操作的技术方法,使其作为一种有力的工具用于分析蛋白的结构-功能关系(如抗体识别的抗原表位)、合理的药物设计(如抗体的人源化改造)等研究.以已有晶体结构的人肿瘤坏死因子-α(hTNF-α)作为研究靶抗原.hTNF-α在许多疾病的生理和病理反应中都发挥关键作用,因而成为治疗这些疾病的有效靶分子.抗hTNF-α中和性单抗作为hTNF-α活性的阻断剂,已被用于治疗类风湿性关节炎、脓毒性休克和炎性肠病等疾病,在国际和国内都有广阔的发展前景.该室研制的小鼠抗hTNF-α单抗Z12,由于具有中和活性和较高亲和力,因而具有理论研究和实际应用意义.该研究中的Z12抗体可变区基因序列由该室获得,具有独立的知识产权;抗体的可变区序列、抗体识别的抗原表位以及人源化改造方法与已公开发表的抗体均有所不同.

目录

摘要

引言

第一部分Z12抗体Fv结构的同源模建及抗原抗体复合物模型的建立

一Z12抗体Fd和κ链基因的钓取

二Z12抗体Fv结构的同源模建及抗原抗体复合物模型的建立

1材料与方法

2结果

3讨论

小结

第二部分Z12抗体靶向部位的实验研究

一Z12抗体识别抗原片段的确定

1材料与方法

2结果

3讨论

二 Z12抗体识别抗原表位的确定

小结

第三部分 抗体人源化的计算机辅助分子设计

1材料与方法

2结果

2.2依据可及性表面积确定Z12抗体FR中的关键残基

2.3依据表观静电分布确定Z12抗体FR中的关键残基

2.4Z12抗体人源化改造方案的制定

2.4定点突变的Fv空间结构模拟

2.5人源化抗体亲和活性的预测

3讨论

小结

第四部分 人源化抗体基因的克隆、表达与活性研究

一 人源化抗体基因的克隆

二 人源化抗体Fab可溶性表达载体的构建与表达

三 人源化抗体的活性研究

小结

总结

参考文献

致谢

英文缩略词表

博士期间发表及投出文章目录

附录一 022 人肿瘤坏死因子-a突变蛋白与活性部位分析

附录二 用一种新型的PCR方法快速制备人TNF-a缺失突变体

博士期间参加的会议

博士期间获得的奖励

专利