宠物龟结膜炎的临床诊断、病原学及治疗的研究

摘要

人们把巴西龟(Trachemys scripta elegans)、乌龟(Chinemys Reevesii)等许多两栖爬行动物作为宠物豢养的历史与文化源远流长。虽有“千年乌龟万年鳖”的说法，但在人工饲养的条件下，由于温度、湿度、饵料等因素，宠物龟易引起各类疾病，严重者将导致死亡。常见的宠物龟疾病有：眼科疾病、呼吸道疾病、腐皮病、烂甲、伤口感染、肿瘤等疾病。其中眼科疾病是患病率最高的疾病之一。宠物龟眼科疾病的高发严重危害了其健康，限制了宠物龟产业的发展。对于宠物龟眼炎的研究国外开展得较早，而国内尚缺乏系统研究。本试验从临床症状来诊断宠物龟结膜炎，并对该病的病原学、血液病理学作了研究；在此基础上对结膜炎病例进行分组治疗，比较分析各组治疗方法的效果。
　　 采用问诊及临床检查的方式对来自上海海洋大学水族宠物诊所患有眼病和具有明显眼部症状的典型病例进行初步诊断。着重检查宠物龟的眼部、呼吸道以及后肢腋窝等部位，并了解病例的吃食情况。使用X线对部分可疑病例进行辅助诊断。结果表明：眼炎有结膜炎、角膜炎、角膜溃烂等多种症状，眼睑结膜炎是患病率最高的一种眼炎。结膜炎病例普遍具有闭眼、眼睑红肿、瞬膜异位，停食现象。此外，部分病例还有张口喘气，鼻腔、嘴角有黏液，或是后肢腋窝处触诊有卵状硬物症状。X线辅助诊断结果显示前者为下呼吸道感染，后者为难产；故将此诊断为继发性眼炎。
　　 自上述18个结膜炎病例的颈静脉处采血，血球计数法进行红细胞、白细胞计数。采用Giemsa-Wright's混合染色法制作血涂片，油镜下观察血细胞形态并对白细胞分类计数。SPSS13.0软件对数据进行整理分析。另购10个体重约500g健康巴西彩龟，作血液的参照样本。结果显示结膜炎病例红细胞总数为0.28±0.05×1012/L，与健康龟相比P＜0.01，差异极显著。白细胞总数为0.14±0.02×109/L，显著增加。宠物龟的白细胞由嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞构成。从白细胞分类计数结果可知，淋巴细胞占白细胞总数的20.4±2.1％，与健康龟的差异极显著，P＜0.01。
　　 从患结膜炎的宠物龟病例的病灶处无菌操作分离出4株疑似病原菌，经过人工回感，确定A5菌株能导致试验龟患结膜炎。人工回归感染试验选用浸染、注射2种方式，浓度分别为3×108CFU/mL、1×108CFU/mL。结果表明浸染组的感染率为75％，而注射组为87.5％。从人工感染发病的试验龟病灶部位再次分离的优势菌B5，其形态和生理生化特征与A5-致，再次肌肉注射感染试验龟后仍能出现与自然发病情况下相同的症状。该结果表明A5菌即为宠物龟结膜炎的病原。根据对菌株的形态、生理生化特性和ATBExpression微生物鉴定系统、BIOLOG微生物鉴定系统以及16SrDNA序列分析的结果显示，该病原菌为荧光假单胞菌(Pseudomonasfluorescensbv.C)。其主要特征为革兰氏阴性，具动力的短杆菌，无芽孢。普通培养基培养，菌落呈圆形、光滑、边缘整齐、直径为2mm左右的淡黄色，粘稠，有特殊气味。采用纸片法，并以ATCC25922、ATCC25923作质控菌株，测定抗生素对该病原菌的抑菌效果。结果表明氧哌嗪青霉素、阿莫西林、阿米卡星、庆大霉素、氧氟沙星、环丙沙星、妥布霉素、卡那霉素的抑菌效果明显。
　　 将40个结膜炎宠物龟病例分成8组，采用不同治疗方法进行治疗，分析不同治疗方案的疗效。治疗结果显示25℃，2次/日给药，氧氟沙星组的药效优于磺胺醋酰钠、氯霉素组，平均治疗天数45天，P＜0.05，具有显著性差异，将其设为对照组。在相同情况下，增加肌肉注射组的治疗时间为43天，P＞0.05，无显著性差异。25℃，氧氟沙星，6次/日给药组，治疗时间为40天，P＞0.05，无显著差异：5℃，氧氟沙星，2次/日给药组，治疗时间为84天，差异极显著P＜0.01:对于眼结膜囊内有分泌物的病例，实施眼科手术组的治疗时间为17天，与空白组差异极显著，P＜0.01。结果表明，氧氟沙星滴眼液为临床优选药物，辅助控温与眼科手术为有效的治疗措施。此研究结果将为宠物龟结膜炎的治疗起到指导性作用。

目录

文摘

英文文摘

上海海洋大学博/硕士学位论文答辩委员会成员名单

引言

第一章 宠物龟疾病临床医学技术的研究进展

1 宠物龟疾病概述

1.1 已报道的宠物龟病例

1.2 国内外宠物龟疾病临床医学技术

2 宠物龟主要疾病的临床诊治分述

2.1 外伤

2.2 皮下增生和炎症疾病

2.3 呼吸道疾病

2.4 肠胃病

2.5 泌尿系统疾病

2.6 生殖系统疾病

3. 宠物龟疾病临床医学的关键技术

3.1 宠物龟的麻醉术

3.2 宠物龟的临床用药

3.3 手术疗法

4. 宠物龟眼炎的研究概况

4.1 宠物龟眼睛的结构

4.2 宠物龟眼炎的病因、病原与治疗

4.3 宠物龟眼炎的研究意义

第二章 宠物龟结膜炎的临床诊断

1. 材料与方法

1.1 眼病和具有眼部症状宠物龟的典型病例

1.2. 问诊和填写病历

1.3 基本检查项目和填写病历

1.4 X光检查

2. 结果

2.1 临床症状和特征表象

2.2 X线检查结果

2.3 诊断结果

2.4 结膜炎的发病过程

3. 讨论

3.1 眼炎的分类诊断

3.2 单纯性眼炎与眼炎综合症的诊断区分

第三章 宠物龟结膜炎的血常规检查

1. 材料与方法

1.1 主要仪器与试剂

1.2 试验动物

1.3 血样制备

1.4 血细胞计数

1.5 血涂片制作

1.6 白细胞分类计数

1.7 数据处理

2. 结果

2.1 血细胞形态学观察

2.2 血细胞计数

3. 讨论

3.1 宠物龟的血液学研究方法

3.2 宠物龟血细胞的分类

3.3 宠物龟结膜炎的血细胞变化

第四章 宠物龟结膜炎病原的分离及鉴定

1. 材料与方法

1.1 主要器材和试剂

1.2 试验动物

1.3 病原分离培养

1.4 人工回感试验

1.5 形态观察与生理生化试验

1.6 BIOLOG全自动微生物鉴定系统鉴定

1.7 16SRDNA序列测定与分析

1.8 药敏试验

2. 结果

2.1 分离纯化结果

2.2 人工感染结果

2.3 病原形态及培养特性

2.4 生理生化鉴定

2.5 BIOLOG全自动微生物鉴定系统鉴定

2.6 16SRDNA序列测定与分析

2.7 药敏试验结果

3. 讨论

3.1 宠物龟结膜炎的病原和病因

3.2 病原鉴定方法的比较

第五章 宠物龟结膜炎的临床治疗方案比较研究

1. 材料与方法

1.1 结膜炎病例

1.2 治疗药物及其遴选

1.3 治疗方案

1.4 病例治疗结果评判标准

1.5 数据统计

2. 结果

3. 讨论

小结

参考文献

致谢