新型光敏剂二氢卟吩e6-C15单甲酯光谱性质及体内代谢的初步研究

摘要

肿瘤光动力治疗新药二氢卟吩e6-C15单甲酯系蚕砂叶绿素经酸、碱降解后分离制备得到的单体二氢卟吩e6衍生物，具有化学性质稳定、肿瘤/正常组织分布比高、光敏化力和肿瘤光生物活性强等优点，是一种有前途的卟啉类光敏剂，对其开展临床前基础性研究具有重要意义。本课题主要考察了二氢卟吩e6-C15单甲酯的光谱学特性，以此为基础建立了二氢卟吩e6-C15单甲酯在生物样品中含量测定的荧光分析法，研究了二氢卟吩e6-C15单甲酯在SD大鼠体内的代谢动力学特征。
　　一、二氢卟吩e6-C15单甲酯荧光光谱特性的研究。
　　本试验开展了二氢卟吩e6-C15单甲酯在不同溶剂体系中荧光光谱特性的研究。首先比较分析了二氢卟吩e6-C15单甲酯在甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、磷酸盐缓冲液和水6种不同溶剂体系中的荧光光谱特征，进一步考察了有机溶剂含量和溶液pH对二氢卟吩e6-C15单甲酯发射波长和荧光强度的影响。结果表明pH7.2磷酸盐缓冲液-乙腈（3:7）混合溶液中二氢卟吩e6-C15单甲酯荧光强度大、性质稳定；二氢卟吩e6-C15单甲酯荧光分析法检测的最佳激发波长为398.00nm或498.00nm，最佳发射波长为664.05nm。
　　二、血浆生物样品中二氢卟吩e6-C15单甲酯定量分析方法的建立与确证。
　　本试验以二氢卟吩e6-C15单甲酯的荧光光谱特性为基础，首次建立了简便、快速、可靠的检测血浆生物样品中二氢卟吩e6-C15单甲酯的荧光分析法。采用pH7.2磷酸盐缓冲液-乙腈（3:7）混合溶液沉淀SD大鼠血浆蛋白，选择498.00 nm和664.05 nm作为激发波长和发射波长，建立的SD大鼠血浆样品中二氢卟吩e6-C15单甲酯荧光分析法专属性好，灵敏度高，血浆内源性物质及其它物质均不干扰样品的测定。二氢卟吩 e6-C15单甲酯血药浓度测定的线性范围为0.50~50.00μg·mL-1，最低定量限为0.50μg·mL-1，低、中、高QC样品的批内和批间相对标准偏差小于5.68％，相对回收率大于93.88%。血浆生物样品经蛋白沉淀处理后的提取回收率大于90.65%，高浓度样品经稀释后不影响其实际血药浓度的测定结果。二氢卟吩e6-C15单甲酯标准贮备液15天（避光、密封、低温-20℃）放置稳定性和血浆样品室温2h放置稳定性、预处理后2h稳定性、反复三次冻融稳定性、15天（避光、密封、低温-80℃）放置稳定性考察结果表明：在一定贮存条件下，二氢卟吩 e6-C15单甲酯贮备液和血浆样品短期和长期稳定性均良好。
　　三、二氢卟吩e6-C15单甲酯在SD大鼠体内的药代动力学研究。
　　本试验选用18只健康、成年SD大鼠，体重200±20g，雌雄各半，随机分成三组进行试验，分别于尾静脉单剂量注射给药1 mg·Kg-1，2 mg·Kg-1，4 mg·Kg-1二氢卟吩e6-C15单甲酯注射剂后按既定时间点从眼眶静脉丛采血。采用评价的荧光分析法测定血浆中二氢卟吩e6-C15单甲酯的浓度，结果由BAPP2.0软件进行处理，经非房室模型法（统计矩法）估算相应的药代动力学参数。
　　实验结果表明，SD大鼠单剂量静注1、2、4 mg·Kg-1的二氢卟吩e6-C15单甲酯后，二氢卟吩e6-C15单甲酯的药代动力学药时曲线末端相消除半衰期(t1/2)分别为51.93±23.28h、35.54±6.97h、28.67±8.93h；平均驻留时间(MRT)分别为65.38±31.73h、43.00±9.04h、34.71±11.58h；初始浓度(C0)分别为16.52±2.13μg·mL-1、32.89±5.59μg·mL-1和62.34±7.83μg·mL-1；药时曲线下面积(AUC0-τ)分别为153.56±38.10μg?h·mL-1、281.42±9.59μg?h·mL-1、460.54±37.65μg?h·mL-1；药时曲线下面积(AUC0?∞)分别为240.88±112.23μg?h·mL-1、355.23±26.62μg?h·mL-1和546.49±83.39μg?h·mL-1；总清除率(CL)分别为4.87±1.96 mL·h-1·Kg-1、5.66±0.48mL·h-1·Kg-1和7.48±1.26 mL·h-1·Kg-1；表观分布容积(Vd)分别为273.99±79.33mL·Kg-1、240.27±38.13mL·Kg-1和248.21±54.16mL·Kg-1。药代动力学参数线性分析的结果为三个剂量组初始浓度（C0），AUC0-τ符合线性药代动力学特征，随给药剂量成线性变化。
　　四、SD大鼠多剂量给药二氢卟吩e6-C15单甲酯后体内蓄积效应研究。
　　本试验采用6只健康、成年SD大鼠，体重200±20g，雌雄各半，进行二氢卟吩e6-C15单甲酯在SD大鼠体内多剂量给药的药代动力学研究。受试SD大鼠分别于每日晨间同一时刻尾静脉注射给药2mg·Kg-1二氢卟吩 e6-C15单甲酯注射剂，连续7日。从第五日开始给药前采集血样，第7日给药后按单剂量试验时间点采集血样。荧光分析法测定不同时间点SD大鼠体内二氢卟吩e6-C15单甲酯的血药浓度，考察二氢卟吩 e6-C15单甲酯多剂量给药在体内的稳态过程、峰(Cmax)－谷(Cmin)波动系数DF、稳态药代动力学特征以及可能产生的蓄积效应等。
　　试验结果表明，从第五日起SD大鼠体内二氢卟吩e6-C15单甲酯的血药浓度已基本上达到稳态，即血药浓度不再随给药次数增加而增加。多剂量静注给药二氢卟吩 e6-C15单甲酯2mg·Kg-1后 SD大鼠体内稳态药代动力学过程初始峰浓度（Cmax）、谷浓度（Cmin）、坪浓度（Cav）和AUCss分别为：36.68±4.61μg·mL-1、0.85±0.18μg·mL-1、3.55±0.58μg·mL-1、255.91±41.39μg?h·mL-1。通过综合分析SD大鼠多剂量给药实验后体内二氢卟吩e6-C15单甲酯动态过程药时曲线的比较结果、峰浓度 Cmax和药时曲线下面积 AUC0-τ的显著性差异检验结果以及药时曲线AUC0-τ的平均累积比，均提示二氢卟吩e6-C15单甲酯血药浓度在SD大鼠体内不产生蓄积效应。

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第一章 引 言

1.1 肿瘤光动力疗法概述

1.2 肿瘤光动力治疗药物概述

1.3 课题研究背景和内容

第二章 二氢卟吩e6-C15单甲酯荧光光谱特性的研究

2.1 概述

2.2 实验材料和仪器设备

2.3 实验方法

2.4 结果与讨论

2.5 本章小结

第三章 血浆生物样品中二氢卟吩e6-C15单甲酯定量分析方法的建立与确证

3.1 概述

3.2 实验材料和仪器设备

3.3 实验方法

3.4 方法学评价

3.5 实验结果

3.6 讨论

3.6 本章小结

第四章 二氢卟吩e6-C15单甲酯在SD大鼠体内的药代动力学研究

4.1 概述

4.2 实验材料和仪器设备

4.3 实验方法

4.4 实验结果

4.5 讨论

4.6 本章小结

第五章 SD大鼠多剂量给药二氢卟吩e6-C15单甲酯后体内蓄积效应研究

5.1 概述

5.2 实验材料和仪器设备

5.3 实验方法

5.4 结果与讨论

5.5 本章小结

第六章 结 论

参考文献

致谢

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