鲍“肌肉萎缩症”病毒与类疱疹病毒的流行病学研究

摘要

1999年至2002年间，在中国南方沿海，许多养殖场的鲍出现了重大的病害并大量死亡。首次爆发是在福建省东山县，然后蔓延至南方沿海其他地方，包括广东、海南、台湾等省，给南方鲍养殖业造成重创。研究认为该鲍流行病是由低温病毒引起的，而鲍“肌肉萎缩症”病毒（abalone shriveling syndrome-associated virus，AbSV）和鲍类疱疹病毒(abalone Herpes-like Virus，AbHV)可能就是该低温病毒病病原。为进一步掌握AbSV和AbHV两种病原的流行特点及规律，采集了2012年4月至2013年1月，2013年5月至2013年10月期间，中国南方沿海包括福建东山，广东汕头、惠来、汕尾、惠东，海南三亚等七个地区的养殖鲍。其中2012年4月至2013年1月的鲍样品由上一届杨蕊同学完成采集、DNA提取、病毒检测，在此采用，旨在更全面宏观的分析两种病毒的流行情况。利用SYBR GreenⅠ染料法荧光定量PCR检测AbSV在鲍体内的含量以及Taqman探针法荧光定量PCR检测AbHV的含量。研究发现AbSV和AbSV仍存在于中国南方沿海养殖鲍体内。AbSV流行开始于8月或9月，在9月或者10月达到高峰期；纬度较低的养殖场鲍体内病毒含量略高些，如广东汕尾、惠东。AbSV流行的最适温度是25-29℃。AbHV流行开始于9月或10月，在11月或12月达到高峰期。AbHV的开始流行时间和达到高峰期时间都比AbSV要晚一个月。AbHV的含量随季节温度变化有两个高峰期，分别在17-19℃和26-29℃。另外，结果分析显示，AbSV或AbHV的含量与鲍的种类（杂色鲍和皱纹盘鲍）、鲍的规格大小以及两种养殖方式（人工池内养殖和海区筏式养殖）没有明显的相关性。
　　AbSV结构形态还未确定，需要进一步的纯化分离为形态结构鉴定打下基础。本研究优化氯化铯梯度超速离心方法分离纯化AbSV，发现AbSV位于浮力密度1.35-1.42g/ml的位置。为防止病毒在离心过程中被重金属氯化铯破坏解聚，加入1％甲醛处理，对AbSV具有很好的保护和分离效果。首次建立了AbSV层析分离纯化技术，结果显示AbSV位于电导为32—40 mg/cm的位置。而层析分离纯化的AbSV组分浓缩后进行SDS-PAGE实验，发现了其与阴性（不含AbSV）鲍样品不同的蛋白条带。
　　在AbSV和AbHV的人工感染实验中，注射和混养两种人工感染方式均未使杂色鲍(Haliotis diversicolor)和皱纹盘鲍(H. discus)感染AbSV。两种人工感染方式使杂色鲍均感染了AbHV，并全部死亡。注射感染的杂色鲍在第4天开始死亡，并在第8天达到死亡高峰期；混养感染的杂色鲍第7天开始死亡，在第11天达到死亡高峰期。注射感染的杂色鲍开始死亡时间以及达到死亡高峰期时间均比混养感染的杂色鲍提前3天。此次人工感染温度为19℃，AbHV两种方式感染杂色鲍成功，并且流行病学调查发现其最适温度之一是在17-19℃，这些均与之前的研究认为AbHV为低温病毒相符。另外，混养感染的皱纹盘鲍未感染AbHV，说明其对AbHV有一定的抗病能力。

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第一章 引 言

1 中国鲍养殖现状

2 鲍病毒性疾病研究概况

3研究意义和目的

第二章 鲍“肌肉萎缩症”病毒和类疱疹病毒流行病学调查

1 材料与方法

2 实验结果

3 小结与讨论

第三章 氯化铯密度梯度超速离心纯化鲍“肌肉萎缩症”病毒

1 材料与方法

2 实验结果

3 小结与讨论

第四章 层析分离鲍“肌肉萎缩症”病毒

1 材料与方法

2 实验结果

3 小结与讨论

第五章 鲍“肌肉萎缩症”病毒与类疱疹病毒人工感染

1 材料与方法

2 实验结果

3 小结与讨论

第六章 全文小结

参考文献

附录

论文发表情况

致谢