生地黄止血物质基础及海绵剂制备工艺研究

摘要

本文选用唐代孙思邈《千金方》中收载药方[1]：生地黄汤为对象，研究了方中的君药生地黄的药效物质基础，并对由此基础发展而来的海绵剂进行了制备工艺、质量评价等方面的研究。
　　 目的：初步筛选生地黄止血作用的药效物质基础。研究生地黄止血有效部位HPLC指纹图谱。优选生地黄的提取工艺，筛选出最佳工艺参数。筛选生地黄止血海绵剂的最佳制备工艺。建立生地黄止血海绵剂的质量标准。
　　 方法：采用经典的系统溶剂法(极性由小到大:石油醚-乙酸乙酯-正丁醇-乙醇)提取生地黄水煎液，用剪尾法和毛细玻管法测定出、凝血时间，比较各部位的止血作用；将筛选出的有效部位用大孔吸附树脂进行分离纯化，用不同浓度乙醇进行梯度洗脱，用剪尾法和毛细玻管法测定出、凝血时间，比较各洗脱部位的止血作用。采用高效液相色谱法，Akasil-C18柱(250mm×4.6mm，5μm)，乙腈-水梯度洗脱，检测波长为210nm，流速1.0ml/min，柱温30℃。确定了生地黄止血有效部位的10批指纹图谱共有模式，进行了相似度比较。以样品中多糖含量、各指纹峰相对于梓醇含量的加和作为评价指标，考察药材浸泡时间，加水量，提取时间等因素对生地黄提取工艺的影响。采用单因素实验法，以外观质量、吸水力为评价指标，考察海绵剂的辅料种类、药物与明胶比例2个因素对海绵剂成型性的影响。采用薄层色谱法对止血海绵中生地黄进行定性鉴别；采用高效液相色谱法测定了各指纹峰相对于梓醇的含量；采用紫外分光光度法测定止血海绵中多糖含量。
　　 结果：乙醇部位可明显缩短小鼠的出、凝血时间；水洗脱液、30％乙醇洗脱液、80％乙醇洗脱液均能缩短小鼠的出、凝血时间，水洗脱液剂量与止血作用有明显的正相关性,30％乙醇洗脱液量效关系不明显,80％乙醇洗脱液止血作用量效关系呈现负相关性。确定了生地黄止血有效部位的10批指纹图谱共有模式，进行了相似度比较。最佳提取工艺为：药材用12倍量水，浸泡15min，提取时间为1.5h，提取3次。海绵剂的辅料选用明胶、吐温-80,药物与明胶比例为1:1。定性鉴别薄层色谱斑点清晰；葡萄糖在0.0067～0.067mg/ml呈良好线性关系；梓醇在0.13～2.6μg.呈良好线性关系。
　　 结论：生地黄止血作用的药效活性物质大多存在于乙醇部位，其止血作用的活性成分与糖类、环烯醚萜苷类有关。所建立的方法可用于生地黄止血有效部位指纹图谱测定，并可对其制剂的质量评价提供科学依据。该提取工艺参数客观可行、稳定合理，可为工业化生产提供实验依据。通过指标考察，制备工艺合理可行，成品质量基本稳定。建立生地黄止血海绵剂的质量标准所用方法简便、准确、可靠，可作为生地黄止血海绵剂的质量控制方法。

目录

文摘

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声明

引 言

第一部分 文献综述

第二部分 生地黄止血作用药效物质基础的初步研究

第三部分 生地黄止血有效部位HPLC指纹图谱研究

第四部分 基于谱效相关的多指标综合加权评分法优选生地黄的提取工艺

第五部分 生地黄止血海绵剂制备工艺的研究

第六部分 生地黄止血海绵剂质量标准研究

结 语

参考文献

致 谢