杜仲“盐炙入肾”炮制机理研究

摘要

目的:在盐炙杜仲炮制工艺研究基础上，通过对炮制前后杜仲中化学成分组群及药效学等的变化特征研究，阐明杜仲“盐炙入肾”的炮制机理。 方法:(1)以指纹图谱综合评分为指标，溶媒浓度、溶媒用量、提取时间、提取次数为考察因素;以信息量加权法处理共有指纹峰峰面积数据;采用Expert Design8.05软件设计实验方案。(2)以总黄酮、总木脂素、总多糖和出膏率为评价指标，采用多指标综合评分结合Box-Behnken响应面设计考察不同烘制时间、烘制温度、加盐量对杜仲中各化学成分的影响;筛选杜仲炮制工艺。(3)以总黄酮、总木脂素、总多糖、总氨基酸及主要化学成分京尼平苷酸、绿原酸、京尼平苷及松脂醇二葡萄糖苷的含量为评价指标，采用紫外分光光度法(UV)和HPLC法分析炮制前后杜仲化学成分群组成结构的影响;在此基础上，以氢化可的松致肾阳虚大鼠模型，观察杜仲生品及炮制品对大鼠负重游泳时间、各脏器指数、血清中睾酮、雌二醇、环磷酸腺苷、环磷酸鸟苷、皮质醇和17-羟类固醇的变化情况。(4)按成人用量的50倍量灌胃给予杜仲生品和盐制品浓缩液（浓度2.5g生药/mL/100g体重），采用HPLC法测定杜仲入血成分及有效成分在肾阳虚证模型大鼠肝、肾组织的分布特征。 结果:(1)利用Expert Design8.05软件分析指纹图谱综合评分实验数据，得出杜仲最佳提取工艺为:乙醇浓度69.42％，提取时间132.30min，提取次数2次，料液比12.32倍。(2)响应面回归方程预测杜仲的炮制工艺为:烘制温度140.℃，烘制时间35min，每100g药材加盐量5.0g。(3)UV测定结果显示，生品总黄酮的含量为2.76％，制品总黄酮含量为2.31％，炮制后含量明显下降;生品总木脂素的含量为10.59％，制品总木脂素的含量为9.51％，炮制后含量明显下降;生品氨基酸的含量为4.16％，制品氨基酸含量为5.18％，炮制后含量明显上升;生品多糖的含量为1.26％，制品多糖的含量为2.26％，炮制后含量明显上升。(4) HPLC测定结果显示，京尼平苷酸生品含量为0.38％，制品含量为0.19％，炮制后含量明显下降;绿原酸生品含量0.37％，为制品含量为0.29％，炮制后含量明显下降;京尼平苷生品含量为0.24％，制品含量为0.20％，炮制后含量明显下降;松脂醇二葡萄糖苷生品含量为0.24％，制品含量为0.18％，炮制后含量明显下降。(5)动物实验结果数据显示，模型组与空白组比较具有显著性差异(p＜0.01)，给药组与模型组均有显著性差异(p＜0.05)，杜仲生品组与炮制品组比较，体重、肾脏指数、睾丸指数、负重游泳时间均有显著性差异p＜0.05);睾酮、环磷酸腺苷、环磷酸鸟苷、皮质醇和17-羟类固醇均有显著性差异(p＜0.05)。(6)血清药物化学分析和脏器分布分析结果显示，杜仲入血成分为京尼平苷酸和松脂醇二葡萄糖苷，炮制后两种成分含量略有减少，与体外成分分析变化规律基本一致;肝脏的分布京尼平苷酸含量变化不显著，而松脂醇二葡萄糖苷的含量盐炙后明显大于生品;肾脏的分布，杜仲生品和制品中京尼平苷酸吸收都较高，且差异不明显，松脂醇二葡萄糖苷的吸收也是制品大于生品，吸收较高且差异显著。 结论:盐炙杜仲化学成分组群较生品从类型和含量方面都发生了一定的改变，大多类型总含量下降，但药效学结果显示炮制品优于生品;从而说明化学成分的高低不是影响饮片质量的必然环节，本文在中医药炮制理论“盐炙入肾”的基础，进行杜仲盐炙的炮制工艺参数，旨在从化学成分组群在配比关系上达到最佳角度探讨其炮制原理。

目录

声明

摘要

引言

文献综述

第一章 杜仲炮制工艺研究

第一节 杜仲提取工艺

1 实验材料

2．方法与结果

3．实验数据

4．讨论

第二节 杜仲炮制工艺研究

1 实验材料

2 方法与结果

3 实验数据

4 讨论

第二章 杜仲炮制前后化学成分变化研究

第一节 杜仲生品及炮制品薄层色谱的鉴别

1 实验材料

2 方法与结果

3 小结

第二节 UV法测定杜仲生品及炮制品总黄酮含量

1 实验材料

2 方法与结果

3 小结

第三节 UV法测定杜仲生品及炮制品总木脂素含量

1 仪器与试药

2 方法与结果

3 小结

第四节 UV法测定杜仲生品及炮制品总氨基酸含量

1 实验材料

2 方法与结果

3 小结

第五节 UV法测定杜仲生品及炮制品总多糖含量

1 实验材料

2 方法与结果

3 小结

第六节 HPLC法测定杜仲生品及炮制品含量

1 实验材料

2 方法与结果

3 小结

第三章 杜仲炮制前后醇提物对肾阳虚证大鼠模型的实验研究

1 实验材料

2 实验方法

3 实验结果

4 小结

第四章 杜仲生品及盐制血清药物化学成分变化的预实验

1 实验材料

2 实验方法

3 实验结果

4 小结

第五章 结语

参考文献

致谢