健脑益智胶囊水提部位精制工艺研究

摘要

目的:研究醇沉法、壳聚糖絮凝法、陶瓷膜微滤法等分离技术对健脑益智胶囊水提部位的纯化效果，通过比较不同精制工艺样品的物理吸湿性、化学成分及药理效应等指标，筛选健脑益智胶囊水提部位的精制工艺参数。 方法:1、根据《中国药典》2010年版（一部）各药材项下的有关规定，对健脑益智胶囊中各药味进行鉴别、检查及含量测定;2、以健脑益智胶囊水提部位主要有效成分葛根素转移率和固形物保留率为评价指标，结合单因素试验，采用Box-Behnken响应面分析法优选醇沉工艺;采用L9(34)正交试验设计考察1％壳聚糖加入量、药液浓度、温度等因素对健脑益智胶囊水提部位的影响，优选壳聚糖最佳精制工艺;通过考察不同转速对主要成分葛根素转移率的影响，探求陶瓷膜微滤技术的预处理方法，并考察药液在不同过滤压力和不同浓度下对膜通量、有效成分转移率及固形物保留率的影响，优选陶瓷膜微滤法精制技术的最佳工艺参数。3、比较不同精制工艺的HPLC指纹图谱，考察各精制工艺对水提部位化学成分的影响;比较不同精制工艺浸膏粉的吸湿性，考察各精制工艺所得浸膏粉在不同湿度下的吸湿速率，并预测出浸膏粉的临界相对湿度。4、采用线栓法建立大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型，通过观察给药后大鼠行为学状态和脑组织病理变化以判断造模是否成功，通过检测血清及脑组织MDA和NO含量、T-SOD和GSH-PX活性，综合评价不同精制方法对脑缺血大鼠的保护作用。5、采用向后逐步回归法建立健脑益智胶囊水提部位指纹图谱与脑缺血的“谱-效”回归方程，并进行相关性分析。 结果:1、实验所用各药材均符合《中国药典》2010年版（一部）各药味项下的质量要求;2、醇沉最佳工艺条件为:药液浓度为0.72g/mL，含醇量为60％，醇沉时间为36h，在此条件下葛根素转移率可达到99％以上，固形物保留率为17％;壳聚糖絮凝法的最佳工艺条件为:药液浓度为0.10g/mL，壳聚糖加入量为10％，絮凝温度为室温，在此条件下，葛根素转移率可达到99％，固形物保留率为28％;以高速离心法作为膜分离的预处理方法，在16000r/min下离心15min，对葛根素含量影响较小，且对膜滤过程中膜污染度最小，膜通量最大;陶瓷膜微滤的最佳工艺条件:药液浓度为0.01g/mL，进口压力为0.5MPa，在此条件下葛根素转移率可达到90％以上，固形物保留率为27％。3、各精制样品与原药液有15个主要指纹图谱共有峰，各精制样品共有峰差异主要体现在峰面积大小不同;各浸膏粉达到吸湿平衡时间为72h，均无明显差异，但膜分离工艺所得浸膏粉吸湿率明显高于原药粉及其他精制工艺所得浸膏粉，原药粉、醇沉浸膏粉、壳聚糖浸膏粉及膜分离浸膏粉的临界相对湿度分别为70.42％、63.01％、62.24％和59.64％;4、各给药组血清及脑组织中丙二醛(MDA)含量均低于模型组，有极显著性差异(P＜0.01)，不同给药组组间无显著性差异;血清和脑组织中总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性均明显高于模型组，差异有统计学意义(P＜0.01)，不同给药组组间无显著性差异;各给药组血清及脑组织中一氧化氮(NO)含量均低于模型组，除膜分离组外均具有统计学意义(P＜0.01)，各给药组间无统计学意义。5、“谱-效”相关性分析结果为指纹图谱4号，5号，15号峰对各生化指标均具有显著关联性。 结论:以物理吸湿性、化学指纹图谱及对脑缺血模型的药理效应为评价指标，筛选得到健脑益智胶囊水提部位的最佳精制工艺为醇沉法。验证试验结果表明该法合理可行，为建立健脑益智胶囊的生产工艺提供实验依据。健脑益智胶囊改善脑缺血损伤的“谱-效”具有显著相关性，为今后质量标准的研究提供参考依据。

目录

声明

摘要

引言

第一部分 综述部分

1 健脑益智胶囊的相关研究

1．1 健脑益智胶囊概述

1．2 水蛭的研究现状

1．3 葛根的研究现状

1．4 白茅根的研究现状

1．5 石菖蒲的研究现状

1．6 郁金的研究现状

2 精制技术研究进展

2．1 醇沉技术

2．2 吸附澄清技术

2．3 大孔树脂吸附技术

2．4 膜分离技术

第二部分 健脑益智胶囊水提部位各饮片质量检查

1 实验材料

2 方法与结果

2．1 各饮片水分、总灰分、浸出物的测定

2．2 TLC鉴别

2．3 含量测定

2．4 结论

第三部分 健脑益智胶囊水提部位精制工艺研究

1 试验材料

2 健脑益智胶囊水提部位中葛根素含量测定方法学考察

2．1 色谱条件及系统适应性

2．2 对照品溶液的制备

2．3 供试品溶液的制备

2．4 线性关系的考察

2．5 精密度试验

2．6 稳定性试验

2．7 重复性试验

2．8 回收率试验

3 醇沉工艺考察

3．1 单因素实验

3．2 Box-Behnken实验设计响应面分析优化工艺条件

3．3 最优醇沉工艺验证试验

4 壳聚糖除杂工艺考察

4．1 壳聚糖溶液的制备

4．2 单因素实验

4．3 正交试验设计

5 膜分离工艺方法与结果

5．1 药液前处理研究

5．2 膜分离工艺研究

6 结论

第四部分 不同精制工艺浸膏粉的吸湿性考察

1 实验材料

2 方法与结果

2．1 不同精制工艺浸膏粉的制备

2．2 不同精制工艺浸膏粉吸湿率的测定

2．4 不同精制工艺浸膏粉临界相对湿度测定

3 讨论

第五部分 不同精制工艺样品的HPLC指纹图谱研究

1 实验材料

2 方法与结果

2．1 样品溶液的制备

2．2 方法学考察

2．3 参照峰的选择

2．4 各精制工艺样品指纹图谱分析

3 讨论

第六部分 不同精制工艺健脑益智胶囊对大鼠脑缺血的作用研究

1 实验材料

2 方法与结果

2．1 实验方法

2．2 结果

3 讨论

第七部分 不同精制工艺健脑益智胶囊“谱-效”相关性分析

1 材料

2 数据的处理

3 建立方程的方法

4 结果

5 讨论

结语

参考文献

致谢