生物质谱研究糖蛋白结构方法的建立及其在基因重组糖蛋白结构分析中的应用

摘要

该论文分两个部分,第一部分:生物质谱研究糖蛋白结构方法的建立,第二部分:生 物质谱研究糖蛋白结构方法在基因重组糖蛋白结构分析中的应用.研究内容与主要结果如下:1,建立了用生物质谱测定糖蛋白分子量、糖含量,确定糖苷键类型及糖基化位点等一系 列系统的方法.2,建立了以差位酶切法确定N-糖基化位点个数及辅助确认含糖肽片的方法 .3,尝试了用串联质谱测定蛋白质非端基序列的方法,结合网上数据库检索技术,辅助糖 蛋白的结构确证.4,尝试了用凝集素提取糖肽片的亲和提取方法与MALDI-TOF-MS直接测定 提取物的分析方法,并取得了良好结果,为今后的糖链结构测定奠定了基础.5,应用该研 究工作建立的以生物质谱技术研究糖蛋白结构的方法,对重组的人促红细胞生成素(rhEPO) 的结构进行了测定,结果可靠.

目录

文摘

英文文摘

前言

第一部分生物质谱研究糖蛋白结构方法的建立

一，设计思想

二，实验部分

1仪器与试剂

1.1仪器

1.2试剂

2实验步骤

2.1基质的选择

2.2糖含量的测定

2.3糖基化位点的确定

2.4氨基酸序列的测定

2.5糖肽片的凝集素提取

三，结果与讨论

1基质的选择

2糖含量的测定

3糖基化位点的确定

3.1先酶切、再还原步骤的实现

3.2先还原烷基化、再酶切步骤的实现

4串联质谱测定氨基酸序列

5凝集素对糖肽的亲和提取

四，小结

第二部分：生物质谱研究糖蛋白结构方法在基因重组糖蛋白结构分析中的应用

一，引言

二，实验步骤

1分子量及糖含量的测定

1.1唾液酸含量的测定

1.2 O－糖链测定

1.3 N－糖链含量测定

2糖基化位点的测定

2.1二硫键还原及烷基化

2.2蛋白酶切

2.3 N－糖链酶切

2.4 O－糖链酶切

3凝集素对糖链的提取

三，结果与讨论

1分子量及糖含量的测定

2糖基化位点的确定

3凝集素对糖链的亲和提取

结语

参考文献

致谢

综述