内皮抑制素相互作用蛋白的研究

摘要

该研究结合生物信息学、酵母双杂交、细胞培养等方法,对与内皮抑制素结合的侯选蛋白的特性进行了初步分析,不仅有助于阐明其本身抑制血管生成作用的分子机制,还可为以抑制血管生成和相关抑制物为基础的疾病防治提供新思路、新方法.研究结果可概述为以下几个方面：1.构建内皮抑制素诱饵蛋白载体pGBKT7ENDO并转化至酵母菌株AH109,对内皮抑制素自身的转录激活活性进行了分析,结果表明内皮抑制素自身不具转录激活活性.Western-blot结果表明内皮抑制素能在AH109中表达.2.利用酵母双杂交系统系统3（CLONTECH）从人肝细胞预转cDNA文库筛选内皮抑制素的相互作用蛋白,得到了4个与内皮抑制素有特异相互作用的克隆.序列分析和同源检索表明：它们分别为人肌球蛋白（myosin）、载脂蛋白H（apolipoproteinH)、hepsin（一种与膜缔合的丝氨酸蛋白酶）和一未知蛋白HT036.3.利用哺乳动物细胞双杂交系统（Mammalian MATCHMAKER Tybrid experiments）验证内皮抑制素与人肌球蛋白、载脂蛋白H、hepsin和未知蛋白HT036间在哺乳动物细胞水平的特异的相互作用.4.细胞免疫共沉淀（Co-IP）结果显示在哺乳动物细胞水平能检测到内皮抑制素与人未知蛋白HT036间特异的相互作用,进一步确定了此相互作用的真实性和可靠性.5.利用图形工作站,以1K77晶体结构的原子坐标为依据,结合氢原子及侧链的影响,对人未知蛋白HT036的三维结构进行了同源模建.6.将HT036克隆于p CDNA3.1表达载体,转染ECV304细胞后,初步的研究表明有促凋亡现象.

目录

英文缩略词表及主要仪器设备

前言

第一章内皮抑制素诱饵蛋白载体的构建及其转录活性分析

第二章内皮抑制素相互作用蛋白的筛选

第三章内皮抑制素与侯选蛋白的相互作用在哺乳动物细胞中的确证

第四章内皮抑制素与侯选蛋白的相互作用的Co-IP验证

第五章未知蛋白HT036的结构预测

第六章未知蛋白HT036功能的初步研究

总结

参考文献

致谢

文献综述内皮抑制素的研究进展