人胎盘碱性磷酸酯酶(PLAP)在母鸡输卵管中的表达及其相关研究

摘要

人胎盘碱性磷酸酯酶(PLAP)在母鸡输卵管中的表达及其相关研究随着基因转移技术的不断发展和完善,利用转基因动物来生产基因药物是一项可以获得巨额经济利润的新型产业.目前采用生物工程方法生产的大多数药用蛋白为糖蛋白,其中寡糖链对糖蛋白生物学功能的体现非常重要.在常用的几种表达系统中,大肠杆菌表达系统因缺少蛋白质糖基化修饰所需的糖基转移酶,故不能对所表达的糖蛋白进行糖基化修饰;酵母和昆虫表达系统虽可以对其所表达的蛋白质进行糖基化修饰,但与哺乳动物细胞的修饰方式差异很大.哺乳动物的研究中,有许多蛋白是在转基因鼠、兔、猪、绵羊、山羊和奶牛等的乳腺细胞中表达的,而哺乳动物乳腺反应器也存在如下不足或缺陷:世代间隔时间长,乳汁中的生化成分复杂,以及重组蛋白纯化的难度大等.为此科学家试图建立另外一种新的生物反应器--鸡蛋生物反应器.与其它反应器相比,该反应器有蛋白产量高、易纯化和生产周期短等优点.人胎盘碱性磷酸酯酶(PLAP)是一种糖蛋白,该基因具有表达后容易检测、灵敏度高等优点,而在医学临床检测中被广泛使用,为此该课题将其选为报告基因.该实验同时选用具有雌激素受体的人乳腺癌MCF-7细胞和ZR-75-30细胞、不具有雌激素受体的大肠癌细胞和原代培养的鸡胚细胞,来研究鸡细胞的糖基化和卵清蛋白基因启动子的雌激素依赖性表达调节,通过母鸡输卵管组织特异性表达体系的建立,实现PLAP在母鸡输卵管中的表达.1人胎盘碱性磷酸酯酶(plap)基因的获得.2.plap基因克隆及在大肠杆菌中融合表达.3.构建含plap基因的鸡输卵管组织特异性表达载体.4.转基因鸡生产.5.转基因母鸡的检测.6.脂质体内添加组蛋白对转基因效率的影响.7.PLAP在母鸡输卵管中的表达.8.转基因鸡传代.9.卵清蛋白基因启动子雌激素受体细胞的依赖性表达.10.plap基因在原代培养鸡胚细胞中的表达

目录

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第一章转基因鸡研究进展

1生产转基因鸡的方法

2控制基因表达的方法

3精子载体法转基因动物研究进展

4阳离子脂质体介导基因转移的研究进展

5几种表达系统比较

6雌激素调节组织特异性表达的机制

7关于蛋白质糖基化修饰的研究

第二章转基因鸡制备及PLAP在母鸡输卵管中表达

第一节plap基因克隆及在大肠杆菌中表达

1材料与方法

2实验结果

3讨论

第二节转基因鸡制备及PLAP在母鸡输卵管中表达

1材料与方法

2实验结果

3讨论

第三章卵清蛋白基因表达调节机制的研究

1材料与方法

2实验结果

3讨论

总结

参考文献

致谢