胃癌相关S100P的基因克隆、原核表达及其多克隆抗体的制备

摘要

本文采用了经典的分子生物学研究路线，即从基因表达蛋白，再制备抗体，从而获得抗S100P的高纯度和高特异性多克隆抗体，为临床胃癌检测提供重要依据和奠定基础。首先通过RT-PCR方法扩增S100P基因全长CDs序列，并将目的基因克隆至原核表达载体pET-22b(+)；并随后将阳性克隆导入大肠杆菌BL21(DE3)PlysS中进行诱导表达；利用pET-22b(+)载体在其多克隆位点末端含有多聚组氨酸的特点，通过Ni2+纯化柱进行亲和层析纯化；将纯化的S100P蛋白免疫BAJB/C小鼠，制备抗S100P蛋白的多克隆抗体；进而通过Western印迹，在验证抗S100P蛋白多克隆抗体特异性的同时，即可为验证S100P基因在蛋白水平上是否与胃癌的发生、进展密切相关提供研究基础。

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文摘

英文文摘

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前言

第一部分S100P基因的克隆构建

实验材料

实验方法

实验结果

讨论

第二部分 S100P蛋白诱导表达及纯化

实验材料

实验方法

实验结果

讨论

第三部分 S100P蛋白多克隆抗体的制备

实验材料

实验方法

实验结果

讨论

结论

参考文献

综述 胃癌的分子生物学研究进展

后记