猪苓液体发酵及猪苓多糖的研究

摘要

本课题较为全面地进行猪苓发酵工艺的优化，对菌丝体和子实体多糖的提取方法作比较研究，还进一步对纯化的猪苓多糖探讨其理化特性和生物活性。获得以下研究结果： 1.通过单因子试验和正交试验选择优化发酵培养基主要的营养性因子及含量。试验表明：最适碳、氮源为玉米粉和豆饼粉，最佳碳源浓度为4.0％。最佳氮源浓度为3.0％。最佳C、N组合为葡萄糖3.5％，蛋白胨3.0％。 通过非营养性因子发酵试验，确定猪苓最佳发酵工艺条件是：接种量为10％，温度为25℃，装液量为75ml/500ml。 在上述条件下，摇瓶发酵的最大菌丝体生物量得率是22.77g/L。多糖含量为13.1％。 本研究找到了适合猪苓生长及多糖产生的最佳营养要求和生产条件，缩短生产周期，提高猪苓发酵菌丝体得率和多糖得率。所筛选的培养基能适用于大规模工业化生产，为猪苓菌丝体代替子实体在生产上的应用奠定了基础。 2.对猪苓菌丝体和子实体作氨基酸含量的分析表明：二者含有相似的氨基酸组分。猪苓发酵菌丝体的营养价值不亚于子实体。 3.用酶解处理、微波萃取和超声波破碎并水提等方法分别对猪苓发酵菌丝体和子实体多糖的提取作比较研究。 纤维素酶酶解并水提法最佳工艺条件：酶解温度35℃，加酶量5％，酶解时间0.5h，然后用98℃热水提取1.5h。猪苓菌丝体多糖得率为12.3％。 微波萃取并水提法最佳工艺条件：微波萃取时间8min，进行2次，功率300W，然后用98℃热水提取1.5h。猪苓菌丝体多糖得率8.2％。 超声波破碎并水提法工艺条件：液固比1：15，超声破碎频率18kHz千赫，破碎时间为25min，然后用98℃热水提取1.5h。猪苓菌丝体多糖得率为8.04％。子实体通过纤维素酶酶解处理并水提取法，酶解温度35℃，加酶量5％，酶解时间1.5h然后用98℃热水提取1.5h。子实体多糖得率为5.0％。 本研究首次考察猪苓菌丝体和子实体多糖用微波萃取和超声波破碎等提取方法的最佳条件，为大生产提取多糖新工艺提供基础研究。 4.对分离纯化得到的猪苓菌丝体多糖，用高效液相色谱测得猪苓多糖的分子量及其单糖组分的比例。结果表明：猪苓菌丝体多糖和子实体多糖均由葡萄糖和半乳糖组成，其摩尔比分别是1.57：1和5.42：1。猪苓菌丝体多糖PUm-C和子实体多糖PUf-C是分子量分别为857kD和679kD的大分子纯多糖。 通过红外光谱仪分析其化学结构表明：猪苓多糖的化学结构是以β-糖苷键连接的、以吡喃葡萄糖为主、含有半乳糖的杂聚多糖。 本研究首次报道猪苓纯多糖的单糖组分比例和分子量。为从分子水平上探讨猪苓多糖有效成分提供科学依据。 5.通过动物模型实验，证明猪苓菌丝体多糖对环磷酰胺的免疫抑制效应具有一定的拮抗作用。猪苓多糖单剂和复方方剂具有调节机体免疫功能、激活和提高非特异性杀伤细胞(NK、LAK)的抗肿瘤作用，能发挥免疫正向调节作用。验证猪苓发酵菌丝体多糖具有和子实体类似的抗肿瘤和免疫调节活性。 对猪苓发酵菌丝体的抗菌活性作初步检测。显示猪苓发酵菌丝体及其多糖水提液对大肠杆菌及金黄色葡萄球菌有抑制作用。 综上所述，液体发酵猪苓可获得大量菌丝体，从中提取的大分子猪苓多糖具有抗肿瘤和免疫调节等药理活性，可用于生产和开发猪苓多糖产品。

目录

文摘

英文文摘

学位论文独创性声明及授权使用声明

第一章猪苓液体发酵条件的研究

1.1引言

1.2材料与方法

1.3结果与讨论

1.4小结

参考文献

第二章猪苓菌丝体和子实体多糖提取方法的比较研究

2.1引言

2.2材料与方法

2.3实验结果与讨论

2.4小结

参考文献

第三章猪苓多糖分离纯化及其理化性质、生物活性初探

3.1猪苓菌丝体和子实体多糖的分离纯化及其理化特性的比较研究

3.1.1试验材料

3.1.2试验方法

3.1.3结果与讨论

3.2猪苓菌丝体多糖生物活性初探

3.2.1试验材料

3.2.2试验方法

3.2.3结果与讨论

3.3小结

参考文献

第四章食药用真菌液体发酵及真菌多糖生物活性研究进展

致谢