乙肝核酸疫苗小鼠体内生物分布及与生殖腺基因组整合可能性的初步研究

摘要

该实验采用<'32>P-乙肝核酸疫苗（<'32>P-HBV DNA）,结合三氯乙酸（TCA）沉淀,全身放射自显影和DNA提取后凝胶电泳放射自显影法研究小鼠肌肉注射乙肝核酸疫苗后在机体内的生物分布情况;采用PCR方法研究小鼠肌肉注射非标记乙肝核酸疫苗后与生殖腺基因组的整合情况.结果表明：（1）质粒DNA疫苗除注射局部肌肉分布较多外,其他一些重要组织也有分布,其中腺体组织（肾上腺、胰腺、胸腺）中的浓度最高,其次为排泄物（膀胱、肠内粪）,脑组织中浓度最低.表明<'32>P-乙肝核酸疫苗不易进入血脑屏障.生殖器官在给药早期（10min）也有一定水平分布,但随时间延长迅速降低.（2）各组织酸可沉淀放射性按AUC从高到低排列依次为胸腺、肾上腺、膀胱、生殖腺、脂肪、肠内粪、胰腺、颌下腺、脾、小肠、眼球、肝、肠内容、肾、甲状腺、肺、淋巴结、对侧肌肉、心脏和脑.（3）组织中提取DNA经琼脂糖凝胶电泳,放射自显影显示,胫前肌肌注给药后10min、4hr和24hr肝脏、肌肉及血浆中可见标记乙肝核酸疫苗放射性条带,4d和7d未观察到放射性条带.（4）整体放射自显影结果显示：给药后10min,心肌、肝脏、肺和肾脏中的放射性浓度分布最高,且放射自显影灰度由高到低排列为肾脏>肝脏>肺>心肌,其它时间点未观察到器官或组织特异的高放射性强度区域性分布.（5）该研究PCR法扩增30个循环时,最低可清晰见到20拷贝的扩增产物,小鼠给非标记乙肝核酸疫苗2周后生殖腺DNA经提取、电泳、上样孔处条带胶回收物PCR扩增30个循环后,未见目的条带.

目录

ABSTRCT

前言

第一部分乙肝核酸疫苗的标记、分离、纯化及鉴定

一、材料和方法

1.药品和试剂

2.方法

二、结果

1.未标记乙肝核酸疫苗的纯度鉴定

2.标记混合物的分离纯化

3.标记乙肝核酸疫苗的纯度鉴定

第二部分TCA沉淀法测定药物在机体内的分布

一、材料和方法

1.实验动物

2.药品试剂主要实验仪器

3.标记物的准备

4.标准曲线的制备

5.给药

6.分布实验

7.统计方法

二、结果

1.TCA沉淀法测定组织药物浓度的方法学确证

2.小鼠肌肉注射32P-乙肝核酸疫苗后的组织分布

小结

第三部分DNA提取后凝胶电泳法测定药物浓度

一.材料和方法

1.实验动物、药品

2.试剂

3.主要实验仪器

4.标准曲线的制备

5 DNA提取

6放射自显影

二、结果

1.标准曲线

2.组织DNA提取后凝胶放射自显影扫描图像

小结

第四部分整体放射自显影法测定组织分布

一、材料和方法

1.实验动物、药品

2.主要实验仪器

3.标准曲线的制备

4.动物整体切片

5放射自显影

二、结果

1.标准曲线

2.组织放射自显影

小结

第五部分乙肝核酸疫苗与生殖腺基因组整合情况研究

一.实验材料和方法

1.实验动物、主要仪器

2.药物及试剂

3.PCR检测乙肝核酸疫苗与宿主生殖腺基因组整合的敏感性

二.结果

1.灵敏度

2小鼠注射DNA疫苗2周后生殖腺基因组DNA整合情况

小结

讨论

参考文献

致谢

文献综述