单链抗体在大肠杆菌中可溶性表达研究

摘要

为探索单链抗体及其衍生物在大肠杆菌中的可溶性表达,该研究首先克隆了大肠秆菌dsbA和dsbC基因,构建了DsbA、DsbC、无信号肽DsbC等折叠酶的表达载体,通过将这些折叠酶与单链抗体在大肠杆菌内共表达,发现共表达无信号肽DsbC时可明显增加富含二硫键的人源化抗人纤维蛋白单链抗体-低分子量尿激酶融合蛋白（ScFvIIn-UK）中尿激酶的溶纤活性.同时该研究也尝试了单链抗体与DsbG和MBP融合表达,发现MBP与单链抗体的融合蛋白能够以可溶的形式在胞浆内获得高表达,表达量占全菌蛋白的20﹪左右;单链抗体与DsbG融合表达,可使融合蛋白的可溶性表达量达到全菌蛋白的10﹪以上.另外,该研究运用缺失硫氧还蛋白还原酶基因（trxB）和谷肌甘肽氧化还原酶基因（gor）的大肠杆菌Origami表达单链抗体,发现大多数单链抗体可实现可溶性和功能性表达,其中效果最好的抗多种肿瘤单链抗体的可溶性表达量可占到全菌蛋白的10﹪,且有较强的结合结肠癌抗原的活性;而且在Origami中共表达无信号肽DsbC时,可明显增加富含二硫键的ScFvIIn-UK的功能性表达.

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参考文献

综述