纤维连接蛋白EDA、EDB片段在人体皮肤切创的表达及其重组蛋白的制备

摘要

纤维连接蛋白在三个部位发生可变剪接,分别是EDA、EDB和ⅢCS（在大鼠称为EⅢA、EⅢB和V）.大鼠损伤模型研究发现,EⅢA和EⅢBmRNA分别于伤后30分钟和伤后1小时显著增高,在伤后6小时内,EⅢA和EⅢBmRNA表达量均随时间延长而逐渐增大.为进一步明确人体皮肤切创纤维连接蛋白可变剪接片段EDA、EDB基因表达与损伤时间的关系,我们制备地高辛标记反意RNA探针,在人体切创皮肤标本组织上进行原位杂交,观察人体切创皮肤标本切创边缘细胞的FN-EDA、EDB mRNA表达情况与创伤时间的关系;在此基础上,我们构建融合了EDA、EDB基因片段的质粒,然后用原核细胞表达蛋白质,经过纯化、检测,获得重组融合EDA-EDB蛋白,为进一步制备抗体,通过免疫组化检测EDA及EDB蛋白质推测早期损伤时间打下基础.一、cFN可变剪接片段（EDA、EDB）在人体皮肤切创伤后不同时间的表达.二、重组纤维连接蛋白EDA-EDB融合蛋白的制备.

目录

前 言

第一部分纤维连接蛋白可变剪接片段EDA、EDB基因表达与人体皮肤切创损伤时间的关系

研究之一地高辛标记FN-EDA/EDBRNA探针的制备

引 言

材料

方法

结 果

讨 论

研究之二纤维连接蛋白EDA、EDB mRNA表达与人体皮肤锐器创(切创)损伤时间的关系

引 言

材料

方法

结 果

讨论

第二部分重组纤维连接蛋白EDA-EDB融合蛋白的制备

研究之一纤维连接蛋白EDA-EDB重组质粒的构建

引 言

材料

方法

结 果

讨 论

研究之二EDA-EDB融合蛋白的表达、纯化及检测

引 言

材料

方法

结 果

讨 论

结束语

致 谢

参考文献

综述

附录一

附录二

声明