人类丝氨酸/苏氨酸激酶Aik与细胞周期调控的关系探讨

摘要

该研究拟对Aik2和它的另两个同源基因Aik1和Aik3的功能进行研究.由于肿瘤恶性增殖过程中细胞周期处于失控状态,为了探讨Aik与肝癌发生过程的关系,我们首先用半定量RT-PCR的方法检测了40例肝癌组织标本中Aik基因表达的丰度,结果发现Aik3在多数肝癌标本中的表达没有显著变化,但Aik1、Aik2分别在多数癌组织中显著上调表达.这与以往在其它癌组织中的表达变化检测结果相似,这对关于Aik1和Aik2属于原癌基因的观点给予了进一步支持.为探讨Aik激酶在肿癌中上调表达在细胞周期中的作用,首先需要弄清它们在细胞信号传递网络中所处的位置及相应的级联关系.为此,我们用Aik2作为诱饵用酵母双杂交方法筛选了互作蛋白,结果发现RACK1(活性PKCβⅡ结合蛋白)、CDC20(细胞周期调控蛋白20)、Rcl(c-Myc相关蛋白)、HC8(蛋白酶体蛋白8)和CIB(钙离子、整合素结合蛋白)几种蛋白能与其互作.其中CDC20是一个已知的Aik互作蛋白.它们二者互作可直接影响细胞G2/M期有丝分裂过程.经Pull Down和免疫共沉淀方法鉴定,确定RACK1、Rcl和HC8是新发现的Aik互作蛋白,由于RACK1是一个与CDC20结构类似的蛋白,我们对其与Aik互作的生物学意义作了进一步研究.我们还进一步研究了Aik2和RACK1的互作对NIH3T3细胞的影响.在用pEGFP作为细胞选择标记的条件下,以RACK1、Aik2、RACK1W+Aik2、RACK1ml+Aik2和RACK1m2+Aik2分别转染NIH3T3细胞,流式细胞仪检测结果表明:RACK1的过量表达能够抑制细胞有丝分裂,而Aik2的过量表达却促进有丝分裂,二者同时过量表达时也显示为促进有丝分裂.据此,我们推测RACK1可能是通过与Aik的结合,竞争性调节Cdc20与Aik的互作,从而间接影响细胞周期.

目录

摘要(中文)

摘要(英文)

第一章Aik在肝癌组织中的表达变化研究及Aik互作蛋白的筛选和鉴定

前言

材料与方法

一、材料

二、主要仪器

三、计算机分析软件

四、试剂

五、实验方法

结果

讨论

小结

参考文献

第二章RACkl与Aik相互作用的生物学意义分析

前言

材料与方法

结果

讨论

小结

参考文献

第三章Aik与Septin相互作用的鉴定

前言

材料与方法

结果

讨论

小结

参考文献

综述

参考文献

致谢

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