人酸性成纤维细胞生长因子在大肠杆菌中的表达和纯化

摘要

人酸性成纤维细胞生长因子在大肠杆菌中的表达与纯化 目的:将人酸性成纤维细胞生长因子(human acidic fibroblast growth factor,haFGF)的基因转入大肠杆菌,使大肠杆菌表达haFGF蛋白,并对此蛋白进行纯化和鉴定.方法:首先用PCR方法将原始质粒PGEX-4T-1-haFGF中存在的单个突变碱基予以纠正,获得编码haFGF的正确cDNA序列,然后利用该DNA片断两端的EcoR I和Hind III限制性内切酶位眯进行酶切拼装,使之克隆入表达载体pkk223-3,筛选得到重组质粒pkk223-3-haFGF.再将重组质粒转化大肠杆菌JM109,得到haFGF的工程菌.用IPTG诱导使之表达haFGF蛋白.以肝素亲和层析柱纯化蛋白,然后测定所获得的haFGF蛋白的分子量、氨基酸组成,并通过<'3>H-胸腺嘧啶掺入试验检测haFGF蛋白的生物活性.结论:我们所构建的haFGF工程菌能够表达haFGF蛋白,该蛋白与天然的haFGF蛋白在分子量和氨基酸组成上是一致的,且该蛋白具有一定的生物学活性.

目录

前言

材料和方法

一、主要材料

二、主要仪器

三、方法

1纠正点突变

2重组质粒pkk223-3-haFGF的构建

3haFGF的表达

4haFGF的分离纯化

5haFGF蛋白的鉴定

结果

讨论

结论

参考文献

酸性成纤维细胞生长因子的研究进展

骨髓移植用于治疗缺血性心肌病的研究进展

中英文对照

致谢

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