新型chitosan-DNA疫苗诱生CVB3特异粘膜免疫及其预防病毒性心肌炎的研究

摘要

柯萨奇病毒属细小RNA病毒科肠道病毒属,柯萨奇B3病毒(CVB3)作为代表性的柯萨奇病毒,是CVB的6个血清型中致病性最强的一型,其感染与急、慢性心肌炎和扩张性心脏病高度相关,已成为较严重的社会健康问题,对其致病机制的研究以及相关的防治研究日益受到人们的重视.CVB3为球型二十面体对称无包膜病毒,其核衣壳由四种共60个结构蛋白质VP1、VP2、VP3和VP4组成.作为肠道感染病毒,CVB3在pH3~10范围内稳定,并通过与细胞膜上的CAR/CD55/DAF结合宿主细胞,导致隐藏于核衣壳内部的VP4和VP1蛋白暴露于病毒表面,促进细胞膜对CVB3的包裹和摄入.由于CVB3系粘膜感染病毒,其致病机制与CVB3对心肌细胞直接和间接的病理损伤有关,因此诱生粘膜免疫和特异性细胞免疫应答是预防及治疗CVB3病毒性心脏病的重要措施.DNA疫苗自90年代发展以来,具有诱生全面有效的免疫应答并且易于诱生特异性CTL的特性,在抗感染和抗病毒免疫中具有独特的优势.为诱生CVB3特异性体液及细胞免疫应答,该课题前期研究发现以50μg编码CVB3结构蛋白VP1的质粒DNA经肌肉免疫BALB/c小鼠三次,可诱生CVB3特异性免疫应答,并具有一定的免疫保护作用.然而该DNA疫苗仅诱生了较高水平的IgM和IgG,不能诱生粘膜IgA,而良好的粘膜免疫应答在抗CVB3早期感染中扮演着重要的角色.如何更好地诱生CVB3特异性粘膜免疫应答成为该研究的主要设计思路.甲壳类动物来源的天然生物多糖chitosan证实具有增强粘膜吸收、促进胞间运输、缓释和生物可降解等多种良好特性,已被用于药物赋形剂与缓释剂.为此,该研究综合DNA疫苗诱生体液及细胞免疫的优势、chitosan增强粘膜吸收和缓释的特性,设计了旨在增强粘膜免疫应答的chitosan-DNA疫苗.在此基础上通过引入双功能

目录

英文缩略词

前 言

第一部分 新型chitosan-DNA疫苗的构建和生物学特性研究

材料与方法

结果

讨论

第二部分 新型chitosan-DNA疫苗诱生的CVB3特异性免疫及免疫保护作用

材料与方法

结果

讨论

第三部分 chitosan-DNA疫苗诱生CVB3特异免疫及免疫保护机制的探讨

材料与方法

结果

讨论

第四部分 病毒样复合物chitosan-DNA-HApLys16可增强chitosan-DNA疫苗的免疫保护效果

材料与方法

结果

讨论

第五部分 新型chitosan-DNA疫苗预防病毒性心肌炎的实验研究

材料与方法

结果

讨论

小 结

参考文献

附 录

致 谢

综述chitosan的生物学功能及其在疫苗中的应用

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