不同亚型丙型肝炎病毒非结构蛋白5B与肝细胞蛋白相互作用的研究

摘要

丙型肝炎病毒(HCV)是引起人类丙型肝炎的病原体,可引起急、慢性输血后肝炎.该研究首先对1a、1b、2a三个亚型HCV NS5B核苷酸和氨基酸序列进行了分析.在发现不同亚型HCV NS5B在核苷酸和氨基酸水平具有亚型特异性序列的基础上,利用该实验室早先发现的能与1a亚型HCV NS5B发生相互作用的七个肝细胞蛋白在酵母双杂交系统验证其与1b、2a亚型HCV NS5B的相互作用.在此基础上,对细胞周期依赖性激酶2相互作用蛋白(CINP)与1a、1b、2a三个亚型HCV NS5B的相互作用进行了深入的研究.然后通过设计针对不同结构域的突变体,明确了二者之间的相互作用的部位分别位于HCV NS5B的手指亚结构域1-150位氨基酸内和CINP的C端72-212位氨基酸内.

目录

前 言

第一部分不同亚型丙型肝炎病毒非结构蛋白5B与七个肝细胞蛋白相互作用在酵母双杂交系统的验证

引言

材料与方法

结 果

1. 1b、2a亚型全长和C末端载短21氨基酸HCVNS5B原核表达质粒的构建

2.1a、1b、2a亚型HCVNS5B氨基酸、酸序列比较

3.酵母双杂交系统验证1a、2b亚型C末端截短21氨基酸HCVNS5B与七个肝细胞蛋白的相互作用

讨论

第二部分不同亚型丙型肝炎病毒非结构蛋白5B与细胞周期依赖性激酶2相互作用蛋白相互作用的研究

引言

材料和方法

结 果

1.1、2亚型全长HCVNS5B真核表达质粒的构建

2.体外免疫共沉淀实验检测1a、1b、2a亚型HCVNS5B与CINP的相互作用

3.HCVNS5B与CINP在细胞内的共定位

4.HCV NS5B与CINP相互作用结构域的明确

5.在不同种属组织来源的细胞株中检测CINP基因的表达

6.流式细胞仪检测HCYNS5B的表达，对NIH3T3细胞细胞周期的影响

讨 论

结 语

参考文献

附 录

致 谢

综述：丙型肝炎病毒非结构蛋白5B的研究进展

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