Cyclin D3与hATF5之间相互作用及其转录调控功能的研究

摘要

Cyclin D3蛋白是D型细胞周期蛋白中的一员。近来的研究证实D型细胞周期蛋白能通过两种不同的机制发挥作用。为了寻找能和Cyclin D3相互作用的转录因子，进一步探索Cyclin D3的转录调控功能，本文以Cyclin D3为诱饵蛋白，利用酵母双杂交系统成功的在人胎肝cDNA文库中筛选出Cyclin D3的靶转录因子—hATF5。用酵母共转化实验、GST-Pulldown实验和免疫共沉淀实验进一步证实了CyclinD3和hATF5不管在体内还是体外均能相互作用。而且这种相互作用是特异性的，不管是Cyclin D1、Cyclin D2与hATF5之间，还是Cyclin D3与ATF1、ATF3、ATF4之间均没有相互作用。通过构建突变体，发现Cyclin D3的C端结构域和hATF5的bZip结构域对于Cyclin D3和hATF5之间的相互作用是必需的。通过激光共聚焦实验我们发现Cyclin D3和hATF5能共定位于细胞核内，而且Cyclin D3和hATF5在HeLa细胞中的共转染能促进Cyclin D3和hATF5转移至细胞核内以利于hATF5在细胞核内发挥作用。通过在COS1细胞中的双荧光素酶报告基因测定实验，发现Cyclin D3能增强转录因子hATF5的转录活性。而Cyclin D1和Cyclin D2则对hATF5的转录活性并没有影响。进一步的实验发现，Cyclin D3在调控细胞周期中的靶蛋白CDK4能抑制Cyclin D3对hATF5转录活性的这种增强作用。 在本文的研究中，首次发现了Cyclin D3在发挥转录调控功能中的一个新的靶转录因子—hATF5，并进一步研究了Cyclin D3对转录因子hATF5的转录活性的影响。这为深入了解Cyclin D3的转录调控功能提供了一条新的线索。

目录

前言

材料与方法

结果

讨论

小结

参考文献

综述：细胞周期蛋白与转录调控

致谢

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