人sCD152和sFasL基因克隆表达及sCD152功能研究

摘要

CD152是表达于活化T细胞表面的共刺激信号抑制配体,与抗原递呈过程中T细胞活化的负调控有关.FasL属于肿瘤坏死因子家族,它能传导细胞凋亡信号,诱导活化的T细胞凋亡.由于CD152和FasL都能下调病理性T细胞的活化,所以在器官移植和自身免疫病领域有着很好的前景.以高效分泌表达CD152膜外可溶性片段(sCD152)毕赤氏酵母菌株为材料,大批量发酵表达得到纯化蛋白,通过小鼠体内外一系列免疫试验和人体外双向混合淋巴细胞反应、淋巴细胞转化试验结果显示sCD152具有显著的免疫抑制功能.其中以牛血清白蛋白作为抗原免疫小鼠,sCD152组比对照组的BSA抗体滴度明显降低;而小鼠淋巴细胞增殖试验说明sCD152去除后对初次免疫应答并无明显抑制,且对体内BSA免疫的sCD152组脾细胞体外用OVA刺激得到阳性结果,初步证明了sCD152的免疫抑制特异性.为了获得既带有纯化配体表位又带有可剪切序列的可溶性sCD152蛋白,我们设计构建了含有His-tag和肠激酶识别切割序列DDDDK的sCD152表达载体pPIC-HE-sCD152,结果这一表达载体在毕赤氏酵母中同样高效分泌表达出目的蛋白,大量纯化后用肠激酶酶切去除His-tag,用以进一步功能实验,初步结果表明具有体外细胞免疫抑制功能.为了与sCD152一起诱导更强的免疫耐受,我们设计并构建了sFasL原核表达载体pBV220-sFasL,得到了高表达的基因工程BL21菌株,制备了大量纯化蛋白,经肠激酶剪切后与sCD152一起进行了初步的功能实验,结果显示sFasL对sCD152的体外细胞免疫抑制功能有协同增强作用,为更深入的功能试验打下基础.

目录

前言

一.移植免疫耐受诱导的研究进展

二.融合加切割策略在基因工程蛋白表达中的应用

第一章sCD152的抗原特异性免疫调节功能研究

第二章含肠激酶可剪切His-tag的sCD152表达载体的构建、真核表达和纯化

第三章sFasL表达载体的构建、原核表达、纯化及其与sCD152的免疫功能的初步研究

论文总结

参考文献

致谢

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