免疫抑制药物对成人胰岛细胞毒性作用及其防治措施的体外研究

摘要

目的：成人胰岛细胞移植是治疗1型糖尿病(T1DM)有效的途径。免疫抑制药物对胰岛细胞的毒性作用是阻碍临床广泛开展成人胰岛移植的主要原因之一。本文旨在探讨免疫抑制药物对体外培养的成人胰岛细胞产生毒性作用的机制，并试图寻找合理的防治措施。 方法：1.按照胰岛分离、纯化的改良方法进行成人胰岛细胞的分离和纯化，利用DTZ染色法鉴定胰岛纯度、AO-PI荧光染色法鉴定胰岛活率，并完成胰岛的体外培养。2.选择临床常用或即将使用的免疫抑制药物(MP、CsA、FK506、MPA、Rapa、FTY720)，分别以不同浓度与体外分离、纯化后的成人胰岛共培养，24h后透射电镜下观察胰岛形态学改变、MTT法检测胰岛活力、胰岛素释放试验检测胰岛功能。3.选择胰岛移植中使用或可能使用的免疫抑制药物(FK506、MPA、Rapa、FTY720)，以较高浓度与烟酰胺(NAA，10mmol/l)、己酮可可碱(PTX，5mmol/l)及胰岛共培养，3d后检测培养液上清中的TNFα含量、进行胰岛素释放试验、TUNEL法检测胰岛细胞凋亡。4.核因子κB的抑制剂PDTC、上述四种免疫抑制药物、成人胰岛共培养，3d后进行胰岛素释放试验及凋亡检测，并利用EMSA法检测胰岛细胞核内NF-κB的活性。 结论：1.DTZ染色和AO-PI荧光染色可以对分离、纯化后的胰岛质量进行准确的鉴定。2.MP、CsA、FK506、MPA具有较为明显的胰岛细胞毒性作用，Rapa和FTY720的胰岛细胞毒性较小。3.PTX通过对药物作用下胰岛细胞分泌TNFα的抑制，阻止胰岛发生凋亡，保护胰岛内分泌功能；NAA可能通过影响TNFα以外的凋亡途径，保护胰岛功能。4.NF-κB的活化可能是免疫抑制药物作用下各种因素诱发胰岛细胞损伤的共同途径；PDTC作为一种兼具抗氧化作用的NF-κB抑制剂可以阻断此途径而对胰岛起保护作用。

目录

前言

第一部分成人胰岛的分离、纯化和鉴定

1材料和方法

2结果

3讨论

参考文献

第二部分免疫抑制药物对胰岛细胞毒性作用的体外研究

1材料和方法

2结果

3讨论

参考文献

第三部分烟酰胺、己酮可可碱对胰岛细胞的保护作用及其机制

1材料和方法

结果

3讨论

参考文献

第四部分NF-κ B抑制剂对胰岛细胞的保护作用及其机制

1材料和方法

2结果

3讨论

参考文献

结论

附录(一)综述胰岛移植中免疫抑制药物毒性作用机制及其临床意义

附录（二）ELISA法检测胰岛素含量

附录（三）BCA法检测蛋白浓度

附录（四）中英文名词对照

附录（五）论文发表（第一作者）及奖励

致谢

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