耐药结核分枝杆菌的分子流行病学研究与耐药相关基因的分子生物学快速检测

摘要

本研究采用了一种较为简单的聚合酶链反应－限制性酶切片段多态性(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism，PCR-RFLP)方法对临床耐药结核杆菌菌株中的katG基因最为常见的S315T突变进行了筛选，并对未发现S315T突变的耐异烟肼结核杆菌的katG基因直接测序以研究KatG的基因变异。此外，还应用直接测序法对rpoB基因的突变情况作了分析。除对异烟肼与利福平耐药相关基因谱作分析外，还采用一种新的多位点可变数目串联重复序列分析法(Multiple loci Variable Number of Tandem Repeats Analysis，MLVA)方法对结核分枝杆菌的基因指纹作了分析，对该方法在我国的应用情况作了初步探讨，并研究基因型与耐药性之间的关系。在以上工作的基础上，本研究第二部分建立了基因特异性多重聚合酶链反应(multiplex allele specific polymerase chain reaction，MAS-PCR)以检测临床常见的katG基因和rpoB基因突变，用于对异烟肼和利福平耐药菌的快速检测。

目录

第一部分耐药结核分枝杆菌的分子流行病学研究

一、结核分枝杆菌的耐药表型与基因型的相关性研究

材料与方法

结果

讨 论

小结

二、耐药结核分枝杆菌MLVA指纹图谱研究

材料与方法

结 果

讨 论

小 结

第二部分耐药结核分枝杆菌的分子生物学快速检测

材料与方法

结 果

讨 论

小 结

正文参考文献

综述 结核分枝杆菌对异烟肼和利福平耐药分子生物学机制

异烟肼分子耐药机制

利福平（RFP）分子耐药机制

耐药菌株的传播

耐药性的快速检测

直接测序法

聚合毒链瓜—单链构象多态性分析

双脱氧指纹图谱分析

限制性内切酶片段长度多态性

裂解片段长度多态性分析

RNA/RNA错配法

异源双链DNA构想分析法

线性探针分析法

PNA（PCR-peptide nucleic acid(PNA)-based ELISA）

实时PCR方法（Real time PCR,又称荧光定量PCR）

基因芯片技术（Gene Chip）

参考文献

附录

致谢

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