谷氨酰胺及丹酚酸B对PC12细胞缺糖损伤的保护作用及机制

摘要

心脑血管疾病是对人类健康威胁最大的疾病之一。在此类疾病中又以缺血性脑血管病最为常见。了解神经细胞在体内缺血、缺氧损伤过程中细胞水平、亚细胞水平及分子水平的变化将极大补充我们对缺血损伤的病理机制的了解并为探求有效的治疗方法提供新的思路。 大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12)是常用的神经生物和神经化学研究的细胞模型。本文以PC12细胞(大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞)的无糖培养建立缺糖损伤模型，应用形态学方法观察PC12细胞在缺糖损伤过程中的变化；MTT法检测细胞的存活率；应用流式细胞仪检测亚二倍体细胞的比率及线粒体跨膜电位的改变，从细胞形态到功能等多方面研究谷氨酰酰胺、丹酚酸B、“鹿1”、“鹿2”等多种药物成份对PC12细胞缺糖损伤的作用。 脑缺血也会引起热休克基因(hsp)在脑神经元中的上调表达。葡萄糖调节蛋白75(grp75)基因是hsp70家族的一个重要成员，在缺血时细胞内grp75上调表达是对特定应激的灵敏特异的应答方式。本文还从grp75的表达为思路探讨谷氨酰胺、丹参组份等中药的作用机制。应用了RT-PCR、蛋白印迹杂交、免疫细胞化学、原位杂交等方法研究grp75的表达变化，对其保护的机制进行探讨。谷氨酰胺作用组与无糖对照组相比，Grp75在蛋白质水平、mRNA表达水平检测都有明显的上调表达，而丹酚酸作用组未显示有上调grp75表达的作用。 激光共聚焦显微镜，又称为细胞CT，可对细胞内部结构进行定量、定性观察，和细胞内一些离子定量检测。细胞在缺糖时，Ca2+大量内流，加剧细胞损伤。在对照组及实验组均选取一定数量的细胞，定量观察在不同药物下，Ca2+钙离子的变化。谷氨酰胺及丹酚酸B通过抑制Ca2+内流保护缺糖损伤的细胞。

目录

第一部分谷氨酰胺和丹酚酸B等中药成份对PC12细胞缺糖损伤的保护作用

前言

材料试剂及方法

材料及试剂

实验方法

实验结果

讨论

参考文献

第二部分谷氨酰胺和丹酚酸B等对PC12细胞缺糖损伤保护作用的机制研究

前言

材料试剂及方法

材料及试剂

实验方法

实验结果

讨论

参考文献

小结

综述 心肌缺血再灌注损伤的钙及线粒体机制

在读期间发表文章

致谢

论文独创性声明和使用授权声明