全结肠型巨结肠肠壁内神经标志物表达及其神经支配的研究

摘要

目的:全结肠型无神经节细胞症(TCA)是先天性巨结肠(HD)的一种严重类型，其发生率为2～14％。与常见型HD相比，TCA 诊断困难，死亡率高。明确肠神经异常的范围往往是正确诊断和治疗的关键，临床上对疑似 TCA 的患儿应行剖腹手术，对直肠、结肠、阑尾和末端回肠等行浆肌层活检，但是病理诊断对于 TCA，除缺乏肌层神经节细胞外，没有其他的诊断标准和参考资料，一旦在新生儿期误诊误治常给患儿带来各种严重的并发症。近年来随着对TCA临床意识的提高，对病理诊断的要求也逐步提高。本课题通过免疫组化染色研究不同神经标志物在TCA和常见型HD肠壁内表达的差异，旨在为临床病理诊断提供参考。 方法: 1，复旦大学附属儿科医院1996年1月～2005年12月间收治的 TCA 确诊病例18例，收集 TCA 患儿结肠、回肠全层标本。对照组为常见型HD患儿的乙状结肠组织标本以及肛门直肠畸形患儿的直肠末端标本各10例。 2，收集我院TCA患儿阑尾标本和常见型HD患儿近端正常乙状结肠组织标本各10例，同时将因肠旋转不良行手术治疗的阑尾标本10例设为对照组。行阑尾切除时 TCA 患儿和肠旋转不良患儿年龄均在生后一个月内；HD患儿年龄则在生后2.5～4个月。 3，采用免疫组化染色技术对四种肠壁内神经标记物：S100蛋白、外周蛋白、蛋白基因产物9.5(PGP9.5)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)的表达进行比较，通过LEICADM生物显微镜下测量单位面积肌层组织中神经标记物阳性表达面积百分比，比较TCA和HD患儿病变肠壁神经标记物阳性表达密度。数据分析采用SPSS14.0软件进行T检验，各组数据均用均值±标准差表示，P值小于0.01 表示统计学差异显著。 结果: 1，18例TCA患儿中，16例在术中冰冻病理活检后行回肠造瘘术，其中2例在确诊 TCA后进行一期根治手术。所有 TCA病例的远端肠壁内均无神经节细胞，移行段肠壁内可见少数成熟和不成熟神经节细胞，近端肠壁内神经节细胞发育成熟。常见型HD患儿的直肠乙状结肠交界处和肛门直肠畸形的末端直肠肠壁内均存在发育成熟的神经丛及神经节细胞。 (1)PGP9.5、S100蛋白、NSE和外周蛋白在对照组和TCA组、HD组近端肠壁内表达相似，其神经标记物表达密度无显著差异(P>0.05)。 (2)TCA组和HD组移行段与有神经节细胞肠段相比神经节细胞数目明显减少。HD组移行段内可见少量肥大的神经干。PGP9.5、S100、NSE和外周蛋白在两组移行段内表达低于有神经节细胞肠段，但比较两组移行段内的神经标记物阳性表达存在显著差异(P<0.01)。 (3)TCA组和HD组远端肠壁内神经节细胞均缺如，HD 组远端肠壁中肥大的神经干较 TCA组更多见。PGP9.5、S100、NSE和外周蛋白在两组远端肠壁内均无表达，但肥大神经干呈现显著的阳性免疫反应性。HD 组无神经节细胞肠段中可见肥大神经干呈现外周蛋白免疫反应阳性，而 TCA 组没有或仅有微弱表达。两组无神经节细胞肠段内POP9.5、S100、NSE 和外周蛋白表达存在显著差异(P<0.01)，以PGP9.5最明显。 2，10例TCA阑尾切片冰冻病理和HE染色结果显示阑尾粘膜下和肌层没有或仅见少量神经干，神经节细胞均缺如。肠旋转不良组阑尾和HD组近端正常乙状结肠组织中均找到神经干和发育成熟神经节细胞。 (1)HD组近端正常乙状结肠组织和肠旋转不良组阑尾PGP9.5、外周蛋白和S100免疫组化染色均呈强阳性。但与HD组近端正常乙状结肠组织相比，肠旋转不良组阑尾管壁内神经束和神经纤维分布密度明显减少，且神经节细胞和神经束较细小。PGP9.5、NSE和S100在肠旋转不良组阑尾组织和HD组近端正常肠壁内表达的神经纤维分布密度存在显著差异(P<0.01)。 (2)PGP9.5、S100和外周蛋白在 TCA组阑尾组织中的表达明显少于肠旋转不良组阑尾组织(P<0.01)．PGP9.5，S100和外周蛋白在TCA组阑尾管壁内表达的阳性细胞缺如，而神经干显示免疫阳性反应。外周蛋白表达的神经干数目明显减少，在阑尾浆肌层中神经纤维表达微弱或无表达．PGP9.5和S100在TCA组阑尾环肌中神经纤维几乎无表达，但可见神经束表达． 结论: 本组研究结果表明TCA和常见型HD病变肠段中存在明显的神经标记物阳性表达差异，外周蛋白和PGP9.5是检测肠壁内神经节细胞和神经纤维很好的抗体，S100和NSE对诊断 TCA有一定帮助。PGP9.5、S100 和外周蛋自在TCA组阑尾组织中的表达明显减少，亦可以帮助诊断。总之，本课题希望通过对以上四种神经标记物的研究为诊断TCA提供更多的信息。

目录

论文说明：Abbreviations

声明

Background

1st Part Assessment of neuronal marker and innervations distribution between TCA and HD

INTRODUCTION

METHODS AND MATERIALS

RESULTS

Discussion

Conclusion

2nd Part Assessment of neuronal markers and innervations distribution in TCA appendix

Introduction

METHODS AND MATERIALS

RESULTS

Discussion

Conclusion

Summary

References

发表论文一

发表论文二

发表论文三

Acknowledgements