雌性性早熟大鼠脑内Kiss-1/GPR54的表达及滋阴泻火中药合剂对其表达的影响

摘要

雌性性早熟大鼠脑内Kiss-1/GPR54的表达及滋阴泻火中药合剂对其表达的影响目的：本文以达那唑诱导的雌性性早熟大鼠为模型，通过观察脑内调控青春期发育的关键分子——Kiss-1基因衍生肽kisspeptin及其受体GPR54 (G-proteincoupled receptor 54)在青春期发育进程中的表达规律，探讨kisspeptin/GPR54在性早熟发病中的作用；观察滋阴泻火中药合剂对kisspeptin/GPR54表达的影响以及kisspeptin/GPR54在滋阴泻火中药合剂治疗性早熟中的作用，进一步认识滋阴泻火中药合剂的作用机制。 方法： (1).出生后3天的SD雌性大鼠，随母鼠共同饲养，随机分为正常组(Normal)、载体组(Vehicle)和模型组(Model)。模型组大鼠在出生后5日龄给予皮下注射300μg达那唑。采用免疫组织化学、Westernblot、逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)分别观察青春期启动前(出生后20日龄)、青春期启动(阴门开启为标志)、青春期启动后(建立2个规则的性周期)大鼠脑内Kiss-1/GPR-54 mRNA及蛋白的表达规律。 (2).采用免疫荧光双标技术观察GPR54和GnRH的共存情况，并运用侧脑室微量注射GPR54抗体中和法，观察性早熟模型大鼠在青春期启动前给予不同剂量GPR54抗体(1∶50、1∶100、1∶200)后，阴门开启时间的变化及免疫组织化学法检测脑内kisspeptin及内侧隔核 (rostral medial septum，MS)、Broca斜角带核(Broca diagonal band nucleus．DBB)和内侧视前区 (medial preoptic nucleus，MPOA)促性腺激素释放激素(gonadotropin releasing hormone，GnRH)的表达变化，进一步探讨kisspeptin/GPR54在大鼠性早熟发病过程中的作用。 (3).采用免疫组织化学、逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法，观察喂饲滋阴泻火中药合剂后，性早熟模型大鼠脑内Kiss-1、GPR54、GnRH mRNA及蛋白的表达变化，探讨滋阴泻火中药合剂对Kiss-1/GPR54表达的影响及kisspeptin/GPR-54在滋阴泻火中药合剂治疗性早熟中的作用；并观察预先喂饲性早熟模型大鼠(出生后14日龄)滋阴泻火中药合剂(3ml/次、1次/日、喂药7天)后，在青春期启动前(出生后20日龄)运用药理学方法侧脑室1次性微量注射kisspeptin多肽2nmol、4nmol的方法，观察大鼠阴门开启时间的变化及脑内GPR54和GnRH蛋白的表达变化，进一步探讨滋阴泻火中药合剂治疗性早熟的机制。 结论： (1).性早熟大鼠青春期启动时ARC、PeN和POA的kisspeptin/GPR54的表达异常，下丘脑Kiss-1/GPR54 mRNA 的表达水平增高，可能参与促进大鼠青春期提前启动，导致大鼠性早熟的发生。 (2).侧脑室注射GPR54抗体可能抑制性早熟大鼠GnRH的表达，使性早熟大鼠的性发育延迟，kisspeptin可能直接通过其受体GPR54介导性早熟大鼠青春期的提前启动。 (3).滋阴泻火中药合剂可通过下调下丘脑Kiss-1/GPR54 mRNA及蛋白的表达，抑制GnRH的释放，延缓性早熟大鼠下丘脑-垂体-性腺轴(hypothalamic-pituitary-gonad axis，HPGA)的启动。

目录

论文说明:英文缩写词表

声明

前言

第一部分雌性性早熟大鼠脑内Kiss-1/GPR54在青春期发育进程中的时相和空间表达规律

1.材料

2.方法

3.结果

4.讨论

5.结论

6.参考文献

第二部分Kisspeptin/GPR54参与性早熟大鼠青春期提前启动的机制研究

1.材料

2.方法

3.结果

4.讨论

5.结论

6.参考文献

第三部分滋阴泻火中药合剂对性早熟大鼠下丘脑Kiss-1/GPR54表达的影响

1.材料

2.方法

3.结果

4.讨论

5.结论

6.参考文献

总结

附录

综述 Kiss-1/GPR54的生殖内分泌作用及抗肿瘤转移机制研究进展