腺病毒介导的抗肿瘤基因治疗新策略的实验室评估

摘要

Survivin基因是抗凋亡IAP (inhibitor of apoptosis)基因家族的新成员，在大多数人类肿瘤组织中表达水平异常增高，但是在正常的成人组织中表达水平很低。survivin表达的激活参与了肝癌的发病，以往的研究表明抑制survivin的表达可以破坏有丝分裂进程并促进细胞凋亡。因此，这种肿瘤表达特异性以及促有丝分裂的功能使得Survivin基因成为了肿瘤基因治疗研究的一个新靶点。
　　 为了降低Survivin基因的表达水平，我们特异性地针对survivin mRNA暴露区设计了四个核酶并克隆至pGVa载体:Rl (+61), R2(+83), R3(+232) andR4(+358)，在证实其体外切割活性和效率后，装入非复制性腺病毒载体产生活性核酶分子，通过体内和体外的细胞增殖、凋亡和肿瘤生长等实验证实感染腺病毒一核酶的肝癌细胞中S1irV1V111的聚集受到显著抑制尤以R3为最。R1, R3和R4三联体核酶较之任何一个单体核酶能够更为有效地抑制survivin的表达。此外，通过检测PARP的水解反应可见核酶介导的survivin表达的抑制可以促进肝癌细胞的凋亡。在肝癌细胞移植瘤模型中，核酶的表达可以抑制肿瘤的生成。
　　 我们的实验结果显示针对survivin的核酶可以诱发凋亡并抑制肝癌的生长，本研究为进一步探索Survivin基因在细胞分裂中的作用机制提供了特异性的分