Ⅰ、Ⅱ型子宫内膜癌的临床病理和表观遗传学及Her-2基因异常的研究

摘要

子宫内膜癌为女性生殖道常见三大恶性肿瘤之一，根据其临床特征与生物学行为特点可分为Ⅰ、Ⅱ两种类型：Ⅰ型即为雌激素相关的子宫内膜样腺癌，Ⅱ型为非雌激素相关，包括子宫内膜浆液性乳头状癌(Uterine Papillary SerousCarcinoma，UPSC)、透明细胞癌等类型。Ⅰ、Ⅱ两型不仅有不同的临床病理特征，近年来研究还发现两型子宫内膜癌有不同的分子发生机制。但其中仍有很多机制未明，需要进一步深入研究，并探讨Ⅱ型子宫内膜癌疾病快速进展的分子机制。本研究共分为三个部分：
　　 第一部分Ⅰ、Ⅱ型子宫内膜癌不同的临床病理特征分析
　　 目的：分析比较Ⅰ、Ⅱ型子宫内膜癌不同的临床病理特征及预后因素。
　　 方法：回顾性分析1996年1月至2006年12月11年间我院收治的563例子宫内膜癌，并进行统计学分析。
　　 结果：563例患者中包括Ⅰ型503例(89.3％)和Ⅱ型60例(10.7％)。Ⅰ型患者平均年龄55岁，Ⅱ型平均年龄63岁。Ⅰ型患者中早期(Ⅰ～Ⅱ期)占81.1％，晚期(Ⅲ～Ⅳ期)仅占18.9％；而Ⅱ型患者中早期占55％，晚期患者占45％。Ⅰ型患者术后病理G1～2者占82.5％，而Ⅱ型患者中G3占65％。78.3％的Ⅰ型患者浸润≤1/2肌层，而Ⅱ型患者中43.3％浸润>1/2肌层。平均随访时间33个月，随访期间48例患者死亡。Ⅰ、Ⅱ型患者的3年总生存率(Overall Survival，OS)分别为92.1％和56.5％，5年OS分别为91％和46.8％，差异有显著性(P<0.01)。Ⅰ、Ⅱ型患者的3年无病生存期(DFS，Disease Free Survival)分别为91.6％和62.5％，5年DFS分别为89.5％和56.5％，差异有显著性(P<0.01)。单因素分析发现，Ⅰ型患者中手术病理分期、肌层浸润深度、细胞分化、BMI(体重指数)、绝经、LVSI有统计学意义，与预后相关(P<0.05)；而Ⅱ型中仅手术病理分期、肌层浸润深度和淋巴结受累与预后相关(P<0.05)。多因素分析显示，Ⅰ型患者中手术病理分期、细胞分化和肌层浸润深度的P值<0.05，Ⅱ型患者中手术病理分期P值<0.05，为独立的预后因素。
　　 结论：Ⅱ型患者与Ⅰ型患者相比，发病年龄大，诊断时多为晚期，肿瘤细胞分化差，多伴有脉管癌栓和深肌层浸润，部分侵及浆膜层，故较易发生复发和转移，3年和5年总生存率和无病生存率均较Ⅰ型患者低，是预后不良的重要因素之一。对这部分患者术后应加强辅助治疗，以改善患者的预后。
　　 第二部分Ⅰ、Ⅱ型子宫内膜癌中Wnt通路相关基因的启动子甲基化研究
　　 目的：分析WIF-1、E-cadherin和PTEN基因在子宫内膜癌中的启动子甲基化情况，检测E-cadherin、PTEN和β-catenin的蛋白表达情况，探讨Ⅰ、Ⅱ型子宫内膜癌不同的分子特征。
　　 方法：采用甲基化特异性PCR方法检测105例子宫内膜癌组织和46例配对的癌旁子宫内膜组织中WIF-1、E-cadherin和PTEN基因启动子区的异常甲基化，免疫组化方法检测E-cadherin、PTEN和β-catenin的蛋白表达情况。
　　 结果：105例患者包括81例Ⅰ型子宫内膜癌和24例Ⅱ型子宫内膜癌，中位年龄57岁。子宫内膜癌组织中WIF-1、E-cadherin和PTEN基因启动子甲基化率分别为26.7％(28/105)、27.6％(29/105)和18.1％(19/105)，在癌组织中的甲基化率均高于癌旁组织(P<0.05)。E-cadherin基因启动子甲基化多见于预后差的Ⅱ型患者，两型之间有显著性差异(P<0.05)；WIF-1基因甲基化多见于FIGO分期晚的患者(P<0.05)。子宫内膜癌组织中E-cadherin蛋白表达缺失率为60.0％(63/105)，PTEN蛋白表达缺失率为24.8％(26/105)，β-catenin蛋白表达异常者占29.5％(31/105)。E-cadherin蛋白表达缺失与患者的病理分型(Ⅰ型和Ⅱ型)、FIGO分期和肌层浸润深度显著相关(P<0.05)，β-catenin蛋白表达异常多见于Ⅰ型患者(P<0.05)。单因素分析发现，WIF-1基因启动子甲基化、E-cadherin基因启动子甲基化、PTEN蛋白表达缺失与Ⅰ型患者预后差显著相关(P<0.05)；E-cadherin蛋白表达缺失与Ⅱ型患者预后显著差相关(P<0.05)。
　　 结论：Ⅰ、Ⅱ型子宫内膜癌有不同的分子特征，E-cadherin基因启动子甲基化和蛋白表达缺失多见于预后差的Ⅱ型患者，而β-catenin表达异常多见于Ⅰ型患者。基因启动子甲基化是引起相应的蛋白表达缺失的重要机制。WIF-1基因启动子甲基化、E-cadherin基因启动子甲基化、PTEN蛋白表达缺失和E-cadherin蛋白表达缺失分别是Ⅰ、Ⅱ型子宫内膜癌预后不良的重要指标。
　　 第三部分Ⅱ型子宫内膜癌UPSC中Her-2/neu基因扩增及临床意义研究
　　 目的：检测Her-2/neu基因在子宫浆液性乳头状癌(Uterine Papillary SerousCarcinoma，UPSC)中的扩增和蛋白表达情况，并分析与临床病理及预后的关系。
　　 方法：回顾性分析1996年1月～2006年1月在我院手术治疗的36例子宫内膜浆液性乳头状癌患者的临床病理资料，分别用色素原位杂交(chromogenic insitu hybridization，CISH)和免疫组化方法(immunohistochemistry，IHC)检测Her-2/neu基因在UPSC中的扩增和蛋白表达情况。
　　 结果：IHC检测发现，36例患者中，36.1％(13/36)患者存在Her-2/neu基因蛋白高表达(2+～3+)，其中27.8％(10/36)Her-2/neu蛋白染色2+，8.3％(3/36)染色3+。CISH检测发现11.1％(4/36)患者存在Her-2/neu基因扩增。Her-2/neu基因蛋白过表达与手术分期晚(P=0.015)和预后差显著相关(P=0.093)。
　　 结论：UPSC中存在Her-2/neu蛋白的高表达，并且与手术分期晚和预后差显著相关。CISH是检测Her-2/neu基因扩增情况的一种方便的方法。针对Her-2/neu基因的靶向治疗可能是对化疗耐药、复发或转移UPSC的一种新的治疗方法。