肝癌转移潜能始于原发瘤的研究——激光捕获显微切割和芯片技术分析

摘要

原发性肝癌(简称肝癌)是世界上最常见、恶性程度最高的肿瘤之一,位居全球恶性肿瘤死因第三位、我国恶性肿瘤死因第二位(世界半数以上病例发生在我国)。虽然部分肝癌病人经过早期、积极、综合治疗获得长期生存,但肿瘤转移复发已成为进一步提高其疗效的最主要障碍。肝癌根治性切除后5年复发转移率高达60％。目前临床的主要困扰在于无法早期预测哪些病人会发生转移复发,更无有效防治措施,其关键在于转移机理不清。如能探明肝癌转移的分子机理及其关键调控环节,将有助于早期识别或预测哪些病人易于转移,有助于探索有效的干预措施。
　　 目前的TNM分期、Edmondson's分级等对肝癌临床诊断治疗起重要作用,但无法对肿瘤的转移倾向进行准确预测。以芯片技术为代表的高通量分子生物学技术的发展为在全基因组、蛋白质组范围内研究肿瘤发生、进展相关的分子改变提供了有力的手段,已在多种肿瘤的分子分型、复发转移预测、肿瘤对治疗的反应及预后等研究中得到了广泛应用。
　　 我所前期工作中,通过比较40例伴与不伴肝内转移肝癌间、肝癌肝内转移灶与原发瘤间基因表达谱的差异,发现肝癌转移灶与其原发瘤间基因表达谱非常相似,有差异的基因数目极少(p＞0.05);而伴与不伴转移的肝癌间基因表达谱却有非常明显差异,在9180个基因中发现153个基因表达差异有显著性(p＜0.001),且这些差异与肿瘤大小、有无包膜、有无肝硬化及患者年龄等临床病理因素无关。特别是有转移小肝癌与无转移小肝癌间基因表达谱有统计学差异,说明基因表达谱的差异不是由于两组肿瘤大小等不同的因素所引起,而仅与是否伴有转移有关。据此在国际上首次提出促使肝癌转移的基因改变发生在原发肿瘤阶段的新观点(Ye QH,et al.Nat Med 2003),更新了过去认为转移潜能的获得是癌进展过程中细胞克隆筛选的结果,这对肝癌转移的防治研究战略将产生重要影响。
　　 为了获得更纯的癌组织和进行更深入验证,本文采用激光捕获显微切割(LCM)、基因表达谱芯片和SNP芯片等技术,研究肝癌肝外转移灶与原发瘤之间以及有和无转移肝癌原发瘤之间基因变化的差异,对“促使肝癌转移基因改变发生在原发瘤阶段