HLA-G表达下降对JEG-3细胞生物学行为的影响

摘要

妊娠期高血压疾病是妊娠期特有的多系统、多器官损伤疾病,该病严重危害母婴健康,是孕产妇与围生儿发病及死亡的重要原因之一,但其发病机制并不明确。免疫因素是研究热点。近年来发现人类白细胞抗原G基因与妊娠期高血压疾病发生发展有关联。人类白细胞抗原-G基因(HLA—G)是一种非经典HLA-I分子,特异性高表达于绒毛外细胞滋养细胞,人类滋养细胞株JEG-3也有高表达。HLA—G诱导母胎界面的免疫耐受,维持妊娠的正常进行。HLA—G在滋养细胞的异常表达,可能导致病理妊娠如妊娠期高血压疾病等。
　　 本课题利用RNA干扰(RNAi)技术抑制滋养细胞株JEG-3中HLA—G的表达,并运用western blot、RT—PCR、MTT、流式细胞检测、Matrigel体外侵袭实验等探讨HLA-G表达下降对JEG-3细胞增殖、凋亡、侵袭的影响。实验结果提示:HLA—G表达下降促进JEG-3细胞凋亡,抑制滋养细胞的侵袭和增殖。
　　 第一部分化学修饰的siRNA体外下调滋养细胞株JEG-3细胞HLA—G的表达
　　 目的:选定有效抑制滋养细胞株HLA—G表达的siRNA。
　　 方法:采用人类滋养细胞株JEG-3进行体外培养,应用RNA干扰技术(RNAi)抑制HLA—G表达,RT—PCR法和Western blot测定HLA—G mRNA和蛋白表达水平,确定有效抑制HLA—G表达的siRNA。
　　 结果:针对HLA—G的3条siRNA均能够明显下调JEG-3细胞中HLA—G mRNA和蛋白的表达,抑制率达到80％-90％。
　　 结论:应用RNAi技术特异性下调JEG-3细胞系中HLA—G的表达,为进一步研究HLA—G在人类母胎免疫耐受、正常妊娠的维持等方面的作用奠定基础。
　　 第二部分 HLA-G表达下降对JEG-3细胞生物学行为的影响
　　 目的:探讨HLA—G对人类滋养细胞株JEG-3生长周期、增殖力和侵袭力的调节作用。
　　 方法:采用人类滋养细胞株JEG-3进行体外培养。应用RNA干扰技术(siRNA)抑制JEG-3细胞HLA—G的表达,RT—PCR和Western Blot检测HLA—G mRNA和蛋白表达水平。Transwell小室、流式细胞术、MTT法分别检测HLA—G表达下降后JEG-3细胞侵袭和生长能力的变化。
　　 结果:HLA-G siRNA转染效率达到80％-9096。siRNA转染后HLA-G mRNA和蛋白表达水平可下调8096—9096。HLA—G表达抑制后JEG-3细胞S期上升,G2-M期下降；早期凋亡明显增多；体外侵袭能力显著降低。
　　 结论:HLA—G可以影响JEG-3的增殖、凋亡和侵袭。HLA—G可能通过调节细胞增殖、侵袭等过程参与妊娠期高血压疾病的发生。
　　 综上所述,应用RNAi技术抑制滋养细胞株JEG-3细胞HLA—G表达后,JEG-3生物学行为发生了改变:增殖和侵袭力下降,凋亡能力增强。其相关机制有待进一步的探索。本研究中应用RNA干扰技术,为深入探索HLA—G在妊娠期高血压疾病发病中的作用奠定了一定的基础。