慢性阻塞性肺疾病患者外周血中性粒细胞凋亡及其与Bak基因的关系

摘要

背景
　　 中性粒细胞是慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者慢性炎症反应的关键细胞,肺组织中的中性粒细胞数量及活性增加,可能与细胞凋亡延迟有关。凋亡基因Bcl-2家族在中性粒细胞的凋亡中占重要地位。该研究探讨慢性阻塞性肺疾病患者外周血中性粒细胞细胞凋亡率的变化及其与凋亡基因Bak mRNA表达的关系。
　　 方法
　　 COPD患者20例,其中稳定期患者10例,急性加重期患者10例。正常对照组,肺功能均正常,包括吸烟者20例和从不吸烟者20例。使用Percoll非连续密度梯度沉降法分离人外周血中性粒细胞,体外培养4h、18h、36h后,加入Annexin V-FITC/PI,用流式细胞仪检测细胞凋亡率。使用半定量RT-PCR检测中性粒细胞Bak基因mRNA的水平。
　　 结果
　　 4h、18h、36h时,COPD急性加重组的中性粒细胞凋亡率较其他组低,差异有统计学意义(P均＜0.001),30h时COPD缓解期组凋亡率(70.2％±6.8％)比不吸烟的健康人组凋亡率(74.6％±5.3％)低,差异有统计学意义(P=0.042)。Bak mRNA水平,与COPD急性加重期外周血中性粒细胞(3.2±1.1)相比较,不吸烟的健康人(5.2±1.2)、吸烟的健康人(4.9±1.6)和均COPD缓解期(4.5±0.9)均较高,差异有统计学意义(P均＜0.001)。另外3组外周血中性粒细胞均较高,p值分别为＜0.001、=0.002和=0.036。30h凋亡率与FEV1、FEV1/FVC％、SpO2％均呈正相关,r分别为0.619(P＜0.001)、0.634(P＜0.001)、0.528(P＜0.001)。BakmRNA灰度值与FEV1、FEV1/FVC％、SPO2％均呈正相关,r分别为0.430(P＜0.001)、0.437(P=0.001)、0.301(P=0.019)。4h、18h、30h外周血中性粒细胞细胞凋亡率与Bak mRNA灰度值均呈正相关,r分别为0.520(P＜0.001)、0.527(P＜0.001)、0.443(P＜0.001)。
　　 结论
　　 COPD急性加重期外周血中性粒细胞凋亡率明显下降,而且在COPD稳定期.外周血中性粒细胞的凋亡率较不吸烟的健康患者相比也有明显的下降;急性加重期外周血中性粒细胞Bak mRNA的水平也较其他组明显下降。提示中性粒细胞凋亡率下降可能是慢性阻塞性肺疾病患者肺部中性粒细胞聚集和起到慢性炎症持续存在的原因之一。而且凋亡率和Bak mRNA的水平之间存在正相关。中性粒细胞的凋亡率和Bak mRNA的水平相关,也与FEV1水平相关,推测他们可能与COPD的严重程度相关,甚至可能是COPD的发病原因之一。