大鼠舌神经和鼓索神经损伤的手术进路及其损伤后味蕾形态变化的研究

摘要

目的:寻找一种方便、有效的损伤大鼠味觉神经的手术入路并观察大鼠舌神经和鼓索神经损伤后舌前2/3味蕾形态的变化。方法:在第一部分实验中,成年SD大鼠24只在充分麻醉后行腹侧颈正中旁切口,分离浅层筋膜,暴露咬肌和下颌舌骨肌。进一步沿两肌间隙分离组织,暴露深处的颞下窝后,仔细分离二腹肌前腹的肌纤维,暴露出舌神经主干。进一步沿该神经往上游追踪,在下颌骨外侧缘的深面可见鼓索神经加入舌神经的分叉处,切断相应神经后止血并关闭切口。观察术后动物的切口情况和一般表现,计算死亡率、感染率等。最后根据术中记录、术后解剖以及查阅相关文献,描述大鼠味觉神经通路以及周围血管和肌肉的解剖并作图。在第二部分实验中,成年大鼠24只,分成鼓索神经切断组、舌神经切断组以及手术对照组。前两组分5天、10天、14天、28天和42天五个时间点,后一组分10天和28天两个时间点,每个时间点有2只大鼠。按照第一部分描述的手术进路对相应味觉神经进行损伤后,到相应时间处死动物,取舌组织作冰冻切片。标本用抗CK8抗体显示味蕾、PI显示细胞核,在荧光显微镜以及共聚焦显微镜下观察拍照。Photoshop下计数味蕾密度、体积及细胞数。独立样本t检验比较每个时间点的组间差别是否有统计学意义。结果:在第一部分实验中,平均手术时间为51.7±8.2分钟,术后动物存活率100％,感染率0％,均在2天内恢复正常活动及进食。同时对大鼠鼓索神经、舌Ⅱ冈神经、迷走神经等味觉神经的走行以及周围的组织的解剖作出描述。在第二部分实验中,大鼠舌/鼓索神经切断后,术侧舌前2/3味蕾出现萎缩,表现为染色强度下降,范围缩小以及细胞极性紊乱,味蕾密度、体积以及细胞数在术后14天下降都最低值;随后味蕾的形态开始恢复,表现为染色强度增加,范围增大以及细胞极性恢复正常,到42天密度恢复至对照组的约70％,体积和细胞数恢复到对照组的90％。对侧舌前2/3味蕾在舌/鼓索神经切断后出现体积增大和细胞数增加,两者计数在14天时达到最大值,随后出现回落,至42天恢复接近正常;但味蕾密度及细胞极性等无明显改变。舌神经与鼓索神经切断组术侧各时间点的味蕾体积和细胞数无统计学差异,但在10～42天各个时间点的味蕾密度有统计学差异,鼓索神经切断组高于舌神经切断组。结论:该手术进路能有效的损伤大鼠舌前2/3的味觉神经。舌前2/3味蕾失神经支配后会发生萎缩,至2周左右程度最严重。随后萎缩的味蕾开始再生,至42天恢复至接近正常水平。同时损伤对侧的味蕾会出现代偿性增生,表现为细胞数目增多以及体积增大,主要发生在损伤后10天～28天里。三叉神经舌支可能对维持味蕾形态起一定的作用。味蕾的再生有赖于损伤神经的恢复,但后者可能不是唯一的机制。