P糖蛋白在激素性股骨头坏死中的作用机制

摘要

目的:
　　 1.体外调控骨髓间充质干细胞(MSCs)P糖蛋白功能,观察其对糖皮质激素诱导的MSCs成脂分化影响。
　　 2.体内调控SD大鼠P糖蛋白功能探索激素性股骨头坏死病理机制,研究通过外周血单个核细胞(PBMC)P糖蛋白功能检测作为激素性股骨头坏死预测指标的可行性。
　　 3.研究通过增强P糖蛋白功能预防激素性股骨头坏死的可行性。
　　 方法:
　　 1.分离培养、扩增SD大鼠MSCs,10ug/ml维拉帕米和5ug/ml利福平调控P糖蛋白功能。在P糖蛋白功能减弱或增强基础上,10-6mol/L地塞米松(DEX)诱导MSCs成脂分化7天,检测胞内甘油三酯(TG)含量和碱性磷酸酶(AKP)活力变化。
　　 2.25mg/kg/d维拉帕米腹腔注射1周,分离SD大鼠外周血单个核细胞(PBMCs)检测P糖蛋白功能变化。P糖蛋白功能减弱的基础上加用21mg/kg/d甲基强的松龙(MPSL)皮下注射4周。第5周经血脂和磁共振(MRI)检查处死取股骨头行组织学和免疫组化分析。
　　 3.10mg/kg/a利福平灌胃1周,分离SD大鼠外周血单个核细胞(PBMCs)检测P糖蛋白功能变化。P糖蛋白功能上调或下调基础上加用21me/kg/dMPSL皮下注射4周。第5周经血脂和磁共振(MRI)检查处死取股骨头行组织形态学分析。
　　 结果:
　　 1.维拉帕米/利福平分别上调/下调MSCs的P糖蛋白功能。无DEX作用下,单纯P糖蛋白功能变化不影响MSCs分化。在DEX作用下,MSC增大变圆,TG(14.03±0.66)和AKP(199.80±68.75)升高。P糖蛋白功能减弱,DEX诱导的TG(16.46±0.50:P＜0.01)进一步升高,AKP(60.00±26.24;P＜0.01)较前下降。P糖蛋白功能增强,DEX诱导的TG(12.50±0.70:P＜0.01)减少,AKP(44.40±13.78;P＜0.01)下降。
　　 2.维拉帕米体内应用减弱SD大鼠PBMC的P糖蛋白功能。无MPSL作用下,维拉帕米组TG高于生理盐水对照组。股骨头MRI和组织学检查与生理盐水对照组无差异。MPSL作用下,MRI示股骨头内T1、T2信号对应异常增高,股骨头坏死率(80％);组织学示脂肪细胞数量和体积增加;骨小梁面积减少。加用维拉帕米后,股骨头MRI异常信号范围增加;脂肪细胞数量和体积进一步增加;骨小梁面积进一步减小;股骨头坏死率(100％,P＜0.05)升高。
　　 3.利福平体内应用增强SD大鼠PBMC的P糖蛋白功能。无MPSL作用下,利福平组TG高于生理盐水对照组。股骨头MRI和组织学检查与生理盐水对照组无差异。MPSL作用下,MRI示股骨头内T1、T2信号对应异常增高,股骨头坏死率(80％);组织学示脂肪细胞数量和体积增加;骨小梁面积减少。联用利福平后,股骨头MRI异常信号范围减少;脂肪细胞数量和体积缩小;骨小梁面积与对照组无差异;股骨头坏死率(50％,P＜0.05)降低。
　　 结论:
　　 1.P糖蛋白功能减弱促进DEX诱导MSCs成脂分化,P糖蛋白功能增强抑制MSCs成脂分化。
　　 2.维拉帕米导致P糖蛋白功能下降升高激素性股骨头坏死率。应用激素前评估PBMCs的P糖蛋白功能有可能实现激素性股骨头坏死的预测。
　　 3.利福平增强P糖蛋白功能降低激素性股骨头坏死率。