颈7神经根切断后靶肌肉运动终板形态和功能学研究

摘要

第一部分：SFMEG用于颈7神经根切断后运动终板功能变化的实验研究
　　目的：运用刺激性单纤维肌电图(sSFMEG)对肌肉内运动终板功能变化进行细胞水平的研究，来探索颈7神经根切断后的代偿过程和可能机制。
　　方法：36只雄性SD大鼠，随机分成7组，每组6只。右侧建成颈7神经根切断模型，左侧为正常对照组。用sSFMEG检测术后第1、2、4、6、8、12周内肱三头肌、背阔肌和伸指总肌(颈7神经根主要支配肌肉)的颤抖(Jitter)和肌纤维密度(FD)变化。所有数据收集后，用SPSS17.0软件进行均值、标准差计算和方差统计学分析。
　　结果：通过对正常SD大鼠418条肌纤维的检测，正常Jitter值范围为16.0±19.2μs(MD±3SD)。在术后1-6周内，有超过10％的Jitter直超过正常范围，在第2、4、6周时实验侧靶肌肉内MCD比对照侧增高有显著性差异(P<0.05)。仅在术后第4周和6周可很少次数遇见阻滞。FD值在术后也逐渐增高，但8周和12周后Jitter值恢复到正常水平，FD值仍继续高于对照侧。
　　结论：在SD大鼠可获得稳定、可靠的Jitter和FD值。SFMEG证实颈7神经根切断术后，第1-6周运动终板功能下降，到第12周基本恢复正常。
　　第二部分：颈7神经根切断后靶肌肉内AChRγ/ε亚基表达变化
　　目的：用SYBRGreenⅠ荧光定量聚合酶链反应方法，研究颈7神经根切断后靶肌肉内乙酰胆碱受体γ-和ε-亚基的mRNA表达水平的变化，结合用WesternBlot检测同期agrin蛋白表达变化，来探索颈7神经根切断后的代偿过程。
　　方法：42只雄性SD大鼠，随机分成7组，每组6只。右侧建成颈7神经根切断模型，左侧为正常对照组。用SYBRGreenⅠ荧光定量RT-PCR方法，检测正常对照组及术后第1、2、4、6、8、12周组肱三头肌、背阔肌和伸指总肌内乙酰胆碱受体γ-、ε-和α-亚基的mRNA表达水平的变化曲线。用Western Blot检测正常对照组及术后第1、2、4、6、8、12周组同样三块靶肌肉内agrin蛋白表达水平。所有数据收集后，用SPSS17.0软件进行均值、标准差计算和方差统计学分析。
　　结果：ε-AchR的mRNA在颈7神经根切断术后第1～6周下调表达(P<0.05)，第6周下降到谷底，在第12周基本恢复到正常对照组水平。γ-AchR的mRNA表达在颈7神经根切断术后第1周就开始上升，到第6周达顶峰(P<0.05)，在第12周下降至正常水平。术后第1-6周的agrin蛋白表达明显高于正常对照组水平(P<0.05)，有统计学差异；术后第8-12周的agrin蛋白表达恢复到正常水平。相同组别的肱三头肌、背阔肌和伸指总肌内γ-/ε-AchR的mRNA比值，agrin蛋白表达基本相同(P>0.05)。
　　结论：运用SYBRGreenⅠ荧光RT-PCR技术和WesternBlot检测，证实在SD大鼠颈7神经根切断后第1～6周内，其靶肌肉内γ-/ε-AChR会出现失神经的转换，agrin蛋白表达升高，但在第12周左右恢复正常。
　　第三部分：颈7神经根切断后靶肌肉运动终板形态变化
　　目的：通过运用乙酰胆碱酯酶染色、银-乙酰胆碱酯酶染色，免疫荧光染色和电镜等多种手段，研究颈7神经根切断后主要靶肌肉内运动终板形态学变化过程，来探索颈7神经根切断术后的代偿机制，以将来进一步判断颈7神经根功能。
　　方法：42只雄性SD大鼠，随机分成7组，每组6只。右侧建成颈7神经根切断模型，左侧为正常对照组。用乙酰胆碱酯酶染色、银.乙酰胆碱酯酶染色，免疫荧光染色和电镜等技术手段检测术后第1、2、4、6、8、12周的肱三头肌、背阔肌和伸指总肌(颈7神经根主要支配肌肉)内运动终板形态学变化过程。所有数据收集后，用SPSS17.0软件进行均值、标准差计算和方差统计学分析。
　　结果：颈7神经根切断后第1周～第3周，主要靶肌肉内运动终板的形态结构无明显变化。颈7神经根切断后第4周～第8周，靶肌肉内某些区域出现少数面积明显增大，乙酰胆碱酯酶明显淡染，电镜下超微结构严重退变的运动终板。术后第12周，运动终板结构得以恢复，并可能在老运动终板附近出现多个小的特化的突触后膜聚集区，以形成新的运动终板。
　　结论：颈7神经根切断后，靶肌肉内运动终板微观形态学会出现改变，并在第12周形态学基本恢复正常。而来源于邻近健康神经的轴突出芽可能是重要的颈7神经根切断术的代偿方式。