中枢神经系统血管外皮瘤的miRNA表达谱和预后相关性分析的初步研究

摘要

血管外皮细胞瘤(hemangiopericytoma，HPC)为一种少见的间叶来源肿瘤，可见于身体各部位软组织及中枢神经系统。目前WHO神经系统肿瘤分类中，将该肿瘤归类于中枢神经系统间叶来源非脑膜上皮肿瘤，WHOⅡ-Ⅲ级。HPC约占原发中枢神经系统肿瘤的0.5％，具有很高的复发率。目前，对HPC发生发展的机制尚未充分的阐明。为了探寻更好的HPC诊断和治疗的有效方法，有必要进一步研究其发病机制。
　　微小RNA(microRNA，miRNA)是一类长度约为19-25个核苷酸的内源性单链非编码小RNA，通过转录后翻译抑制或靶mRNA裂解，参与细胞增殖、分化、凋亡等生物学过程。目前为止，人类基因组中已鉴定出超过2000个miRNAs(http://www.mirbase.org/)，均为组织特异性表达。每个miRNA可以有多个靶基因，其本身的表达又受到不同机制调控，其中包括:转录因子结合、表观改变和染色体异常等，已有大量研究证实人类miRNA是肿瘤发生、发展的重要因子，它们存在于肿瘤相关基因组区域，扮演者肿瘤抑癌基因或癌基因的角色。因此，研究HPC中miRNA表达情况，将为进一步了解HPC病理生理过程提供新的途径，并为进一步的研究提供基础。
　　研究目的:通过高通量基因芯片技术对中枢神经系统HPC-miRNA表达谱式进行初步研究，探寻并验证与血管外皮瘤患者预后相关的miRNA。
　　研究方法:对19例来自华山医院的初发血管外皮瘤石蜡样本和6例正常对照硬脑膜进行miRNA表达谱分析，利用含2006个miRNA探针的微阵列芯片筛选出血管外皮瘤中差异表达的miRNAs。通过置换检验和Cox比例风险回归模型筛选出与无病生存期(PFS)和总生存期(OS)相关的miRNA，用Kaplan-Meier生存分析评价高表达与低表达组之间患者预后的差异。进一步扩大样本，取我院2001-2008年手术治疗的42例（包含前19例）血管外皮瘤石蜡样本，应用实时荧光定量PCR技术验证筛选出的预后相关性miRNA。采用Kaplan-Meier法和Cox比例风险回归模型评估miRNA标记物与患者预后之间的相互关系。运用生物信息学工具PicTar、TagetScan、miRanda、miRBase预测miRNAs的靶基因。
　　研究结果:发现166个在血管外皮瘤和正常对照硬脑膜之间差异表达的miRNA，其中108个上调，58个下调。通过置换检验和Kaplan-Meier生存分析筛选出4个与患者预后相关的miRNA标记(hsa-miR-1273e，hsa-miR-1972，hsa-miR-3934-3p，hsa-miR-4497)。42例样本实时荧光定量PCR结果证实hsa-miR-1273e表达上调与患者预后显著相关(PFS，p=0.034)。多因素Cox比例风险回归分析表明，hsa-miR-1273e表达水平为HPC患者PFS的独立影响因素(p=0.024)。生物信息学分析发现RBBP5、CTNND1、MAPK1、RAP1A、NF2、RERG、RAB33B、BAG1等可能为hsa-miR-1273e作用的靶基因。
　　研究结论:hsa-miR-1273e与血管外皮瘤患者预后显著相关，有助于患者的预后评估，为高风险患者制定治疗策略提供参考。

目录

缩略词表

摘要

引言

第一部分 中枢神经系统血管外皮瘤的miRNA表达谱研究

前言

材料和方法

结果

讨论

小结

第二部分 与中枢神经系统血管外皮瘤复发相关的miRNA筛选研究

前言

材料和方法

结果

讨论

小结

第三部分 hsa-miR-1273e的高表达对中枢神经系统血管外皮瘤复发的预测研究

前言

材料和方法

结果

讨论

小结

参考文献

全文总结

综述

发表论文及参加科研项目

致谢

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