弓形虫/巨细胞病毒/单纯疱疹病毒核酸检测无害化阳性质控品的研究

摘要

近几十年来，我国的经济发展水平得到大幅度提高，同时人口质量问题也开始逐渐受到人们的重视。当前我国的计划生育工作也已经进行了20多年，但优生优育的观念却刚开始被大部分国民接受和重视。我国社会经济水平的发展很大程度上受到人口质量问题的影响，因此我们必须实行优生优育的政策，从而来提高我国人口的质量，这样才能更有利于我国社会经济水平的提高。一般来说从生命科学的角度来看,人类优生是一个多因素的过程，每个生命诞生时都会受到很多因素影响，如遗传因素、环境因素等。生活中我们每个家庭都对能够拥有一个身体健康、性格活泼可爱的宝宝有着很大的期望，但是事实上往往由于优生优育没有普及和落实到位，结果使许多家庭陷入无限的悲伤中，除此之外，先天畸形儿与智障儿等还会在经济上给家庭以及社会带来沉重的负担。而这些先天性缺陷疾病的出现很大程度上来自病原体的感染，而最为普遍的即TORCH病原体的感染。
　　TORCH病原体包括弓形虫(TOX)、风疹病毒(RV)、巨细胞病毒(CMV)、单纯疱疹病毒(HSV)Ⅰ、Ⅱ型。在孕妇怀孕的过程中，常常会因为内分泌系统的改变和机体免疫力的下降而原发或者继发感染这些病毒，导致流产、早产、死胎或者胎儿生长迟缓、发育畸形等，因此为了保证生育质量，优生五项（TORCH）检测显得尤为重要。
　　根据研究显示，优生优育五项病原体的检测已经在孕妇产检时进行了很多年，而且也有着很好的检测、诊断效果，过去由于技术不到位使得流产、先天缺陷婴儿出现等现象也渐渐被即时发现而避免。目前我们还是主要依靠传统的免疫诊断方法来检测和诊断TORCH五项病原，传统的方法的检测结果虽然比较可靠，相对稳定性也比较高,但敏感性相对比较低，往往会出现误诊和漏诊的现象，因此我们需要研究一种比较灵敏而且快速、方便的检测方法。
　　近几年来由于PCR技术的飞速发展,许多研究者开始研究利用这一技术对病原体的核酸进行直接检测，并发展出许多新型的检测技术，这些新型检测技术不同于传统的免疫检测，其无须进行纯培养来分离病原体，这一研究大大缩短了检测诊断的时间。除此之外，一些新型的高科技仪器的出现和使用，使得无法培养和生长速度迟缓的病原微生物的检测，变得精确而且快速。但是对于目前TORCH病原体的核酸检测技术的研究均停留在依次对五种病原体分别进行检测的阶段，五种核酸检测过程比较繁琐，所耗时间较长，因此需要研究一种能够一次性检测多种病原微生物的核酸检测技术，以便节省检测诊断时间，为孕妇、新生儿提供更及时的诊断治疗。
　　本实验利用重组PCR即基因串联技术，将弓形虫病毒（TOX）、人巨细胞病毒（HCMV）及单纯疱疹病毒Ⅰ型（HSV1）三种病原微生物的核酸片段进行重组连接，然后将重组后的核酸片段串联于拥有LacZ区域的PUC118质粒上并转化大肠杆菌JM109，得到含有重组PUC118/HCMV+TOX+HSV1质粒的重组JM109菌株。最终通过辅助噬菌体M13K07的侵染、包含、释放过程，得到大量含有重组病原体基因片段的单链DNA，制得用于弓形虫、人巨细胞病毒及单纯疱疹病毒病原微生物高通量核酸检测的阳性质控品。为TORCH病原体精准、快速、高通量核酸检测技术提供了进一步的参考。

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引言

第一章 文献综述

1.1优生五项病原微生物的研究

1.2 基因串联技术概述

1.3利用噬菌体制备单链DNA核酸检测阳性质控品的研究

第二章 弓形虫/巨细胞病毒/单纯疱疹病毒Ⅰ型基因片段的扩增、联接

2.1 材料

2. 2 方法

2.3 结果与分析

第三章 病原物生物基因串联表达载体的构建

3.1实验设备、材料和试剂

3.2 实验方法

3.3 结果

3.4 小结

第四章 利用M13制备目的基因单链DNA

4.1材料

4.2 方法

4.3 结果

4.4 小结

第五章 总结与展望

5.1 总结

5.2 研究意义

参考文献

攻读学位期间发表论文及所获奖项

致谢