盐酸法舒地尔对内毒素致大鼠急性肾损伤的防治作用研究

摘要

目的：
　　 通过腹腔注射内毒素（lipopolysaccharide，LPS）建立大鼠急性肾损伤（Acute kidney injury，AKI）模型，探讨盐酸法舒地尔（Fasudil hydrochloride，Fasudil）对AKI大鼠血清肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-alpha，TNF-α）、内皮素-1（Endothelin-1，ET-1）、肾组织Rho激酶-I（Rho kinases-I，ROCK-I）及核转录因子-Kappa B p65（Nuclear Transcription Factor ofKappa B p65，NF-κB p65）变化的影响，研究Fasudil在AKI中的肾脏保护作用。
　　 方法：
　　 健康雄性清洁级Wister大鼠65只随机分为空白对照组、AKI模型组和治疗组。
　　 对照组：共5只。1ml生理盐水腹腔注射。
　　 模型组：共30只。再随机分为6个时间点（1h，6h，12h，24h，48h，72h），每个时间点各5只大鼠。LPS，6mg/kg体质量，生理盐水稀释至1ml，腹腔注射，建立AKI模型。
　　 治疗组：共30只。再随机分为6个时间点（1h，6h，12h，24h，48h，72h），每个时间点各5只大鼠。各组在注射LPS1小时前给予Fasudil30mg/kg体质量，同样生理盐水稀释至1ml，腹腔注射。其中48h及72h组每24h追加Fasudil30mg/kg。
　　 各组根据不同的时间点观察1h-72h不等，并在相应时间点采血5ml后处死大鼠。测定血浆内毒素水平，血清肌酐（Cretonnes，CRE）、尿素氮（bloodurea nitrogen，BUN），应用酶联免疫吸附方法（enzyme-linked immunosorbentassay，ELISA）检测各组血清TNF-α、ET-1的浓度含量。免疫组化方法检测肾组织ROCK-I、NF-κB p65的表达。光学显微镜同步观察各组大鼠肾脏病理改变。
　　 结果：
　　 1.血清CRE及BUN变化的比较：模型组CRE、BUN于6h明显升高，与对照组相比，有统计学差异（P<0.05）；并于24h达到高峰，48h则显著下降。治疗组各时间点CRE、BUN变化不如模型组相应时间点升高明显。模型12h，24h组CRE、BUN与治疗12h，24h组相比，有显著性差异（P<0.01）。
　　 2.血清TNF-α变化比较：模型组血清TNF-α浓度于1h立即显著升高，与对照组相比有显著性差异（P<0.01），然后迅速下降，6h及其以后时间点则一直处于比较低的水平，呈陡直的单峰曲线：而治疗组各时间点中TNF-α浓度变化不如模型组明显，模型1h组TNF-α浓度与治疗1h组相比有统计学差异（P<0.05）。
　　 3.血清ET-1变化比较：模型组血清ET-1浓度于1h显著升高，与对照组相比有显著性差异（P<0.01），并于12h达高峰，然后开始下降，72h基本降至正常。模型6h，12h，24h组ET-1的变化与治疗组相应时间点比较有统计学差异（P<0.05）。
　　 4.血浆LPS变化比较：模型组及治疗组中血浆LPS水平于1h迅速增加，与对照组相比有显著性差异（P<0.01），并于6h达高峰，12h则迅速下降，模型组与治疗组相应时间点相比均无统计学差异。
　　 5.肾组织ROCK-I表达变化的比较：对照组ROCK-I在肾小管上皮细胞中显示微量表达：模型1h组Rock-I阳性表达面积显著升高，与对照组相比，差异有统计学意义（P<0.05）；并于12h达高峰，24h开始下降。模型6h，12h，24h，48h组Rock-I阳性表达面积与治疗组相应时间点比较有统计学差异（P<0.05）。
　　 6.肾组织NF-κB p65表达变化的比较：对照组显示NF-κB p65在肾小球及肾小管中有微量表达。模型组NF-κB p65阳性表达面积于1h立即增加，与对照组相比有显著性差异（P<0.01），并于12h达高峰，24h组则显著下降。模型1h，6h，12h，24h组阳性表达面积与治疗组相应时间点比较有统计学差异（P<0.05）。
　　 7.病理切片对照：模型组早期肾小球大致正常，肾小管上皮细胞肿胀、脂肪变性和空泡变性，晚期出现不同程度肾小管上皮细胞坏死，细胞核固缩、溶解、消失。坏死的肾小管上皮脱落入管腔内，呈模糊的颗粒状结构。小管周围的间质充血、水肿及炎性细胞浸润。治疗组出现部分肾小管上皮细胞肿胀、少量变性与坏死，肾间质无明显改变及炎细胞浸润。
　　 8.肾小管坏死评分：模型组于1h即出现严重的肾脏病理损伤，并于24h达高峰。模型1h组肾小管坏死评分明显升高，与对照组相比有显著性差异（P<0.01）。模型组各时间点的肾小管坏死评分与治疗组相比均有统计学差异（P<0.05）。
　　 结论：
　　 Fasudl可能是通过阻断Rho/Rho激酶通路及NF-κB p65途径，降低ET-1和炎性细胞因子TNF-α的表达水平，改善肾功能，减轻LPS导致的肾损伤，对LPS导致的大鼠AKI时肾脏具有保护作用。

目录

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材料与方法

结 果

讨 论

结 论

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参考文献

综 述

参考文献

致 谢

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